外周血结核T细胞检测在肺结核涂阴患者中的临床研究.docVIP

外周血结核T细胞检测在肺结核涂阴患者中的临床研究 　　[摘要] 目的 探讨外周血结核T细胞检测在肺结核涂阴患者诊断中的临床价值。 方法 将研究对象分为两组：肺结核组96例，其中涂阴肺结核71例，其他肺部疾病组60例。所有患者分别进行外周血结核T细胞的γ-干扰素释放试验（TB-IGRA）、血清结核抗体和结核菌素试验（PPD试验）。 结果TB-IGRA试验、结核抗体和PPD试验在涂阴肺结核组与其他肺部疾病组阳性率比较，差异有统计学意义（P均0.05），其在涂阴肺结核诊断中敏感性和特异性分别是90.1%和91.7%，阳性预测值、阴性预测值分别是92.8%和88.7%，与结核抗体和PPD试验比较，差异有统计学意义（P0.01）。 结论 外周血结核T细胞检测在涂阴肺结核的诊断上具有敏感性和特异性高、结果客观等优点，有助于对涂阴肺结核的患者进行鉴别诊断，以避免误诊误治。 　　[关键词] 痰涂片；肺结核；诊断；外周血结核感染T细胞 　　[中图分类号] R521 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）28-0099-04 　　结核病是严重危害人们健康的呼吸道传染病，我国结核病发病人数居世界第二位[1]。快速准确地检测结核分枝杆菌的感染是控制结核病流行的关键[2]。细菌学检查是诊断肺结核的金标准，但是肺结核涂阴患者的诊断在临床上常由于痰涂片检测阴性、痰培养方法检测周期长和敏感性低等问题，给临床诊断带来一定的困难。影像学、结核菌素试验、结核抗体和分子诊断技术均存在一定的局限性[3]，因此寻求新方法对肺结核进行早期诊断具有重要的临床意义。结核分枝杆菌是结核病的主要致病原，属于胞内感染菌，诱发反应是以T细胞为主的细胞免疫[4]。近年来，建立在以T细胞为基础的结核分枝杆菌特异性γ-干扰素释放试验目前已列入欧美等国家结核病诊疗指南，以协助诊断结核感染的存在[5，6]。本试验主要探讨外周血结核T细胞检测在肺结核涂阴患者诊断中的临床价值。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　选取2013年7月～2015年3月在我院感染科或呼吸科诊治的患者。入选标准：①患者有咳痰、咳嗽等呼吸道症状，CT检查或X片显示肺部有阴影；②年龄18～60岁，性别不限。排除标准：①妊娠；②SLE、风湿等自身免疫性疾病；③艾滋病；④器官移植、使用免疫抑制剂等患者。肺结核诊断主要依据痰涂片检查、影像学资料和临床症状并参照肺结核的诊断标准排除其他疾病后确诊[7]。涂阴肺结核的诊断符合中华结核病诊治指南。其他肺部疾病患者通过血常规、痰培养、胸片等检查确诊或抗炎治疗排除肺结核者，如肺炎、肺部肿瘤、支气管扩张等。将入选患者分为两组：肺结核组96例（含涂阳25例和涂阴71例），其中男59例，女37例，平均年龄（45.2±13.1）岁；其他肺部疾病组60例，包括肺炎34例，肺气肿9例，肺癌11例，慢性阻塞性肺疾病6例，其中男37例，女23例，平均年龄（46.9±14.5）岁。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 方法 　　入选患者分别检查痰涂片（抗酸染色）、外周血结核T细胞检测、结核抗体（胶体金法）和PPD试验。 　　1.2.1 外周血结核T细胞检测 体外释放酶联免疫法，北京万泰生物公司试剂盒。（1）IFN-γ的体外释放：①在2 h内将全血标本轻柔颠倒混匀3～5次后分装到N（本底对照）、T（测试）、P（阳性对照）三种培养管中，1 mL/管。②培养：将培养管轻柔颠倒混匀5次后迅速置入37℃培养（22±2）h，培养过程中须保持培养管直立。③离心：培养后的培养管以（3000～5000） r/min离心10 min，取血浆进行ELISA检测，注意不可吸到细胞层。（2）IFN-γ的定量检测：采用ELISA法，以校准品（12.5 pg/mL、25 pg/mL、50 pg/mL、100 pg/mL、200 pg/mL、400 pg/mL）的抗原含量及其对应的吸光度均值制得标准曲线，求出线性回归方程，将N、T、P三种培养管培养后血浆标本的吸光度值分别代入回归方程，求得三种管中血浆标本相应的IFN-γ含量。（3）IFN-γ的阳性判定：按照试剂盒说明书进行，以T管与N管含量差值即（T-N）≥14，并且≥N/4，结果判定为阳性[8]。 　　1.2.2 结核菌素试验 采用成都生物制品研究所生产的试剂（BCG-PPD，50 IU/mL）。①以PPD试剂0.1 mL（5IU）于左前臂内侧中上1/3处皮内注射，使局部形成皮丘。②经72 h后观察注射部位硬结平均直径[（横径+纵径）/2）]。硬结5 mm为阴性，5～9 mm为弱阳性，10～19 mm为阳性反应，提示结核杆菌感染，≥20 mm（或20 mm但有水疱或坏死时）为强阳性[9