有机试剂5,荧光试剂.ppt

第五章 荧光试剂 荧光的发现及发展 荧光产生的理论基础 分子荧光光谱 荧光强度、荧光量子产率和荧光寿命 有机试剂结构与荧光的关系 代表性荧光试剂 荧光的发现及发展 十六世纪被发现，但对荧光的产生原理和条件 1852年Stokes考察奎宁和叶绿素荧光 发现荧光波长比照射光波长要长，认定是物质吸收光后重新发射出的光，，提出了“荧光” 1867 Goppetsroder 桑色素荧光检测铝 二十世纪初，已荧光素、稠环芳烃及曙红等600余种化合物有荧光 1924年 Wawwillous测定荧光产率 1926年 Gavila对荧光寿命进行了测定 荧光产生的理论基础 基态和激发态 单重态（S)和三重态 (T) 荧光激发光谱和荧光发射光谱 λemλex 斯托克斯（stokes）位移 荧光强度、荧光量子产率和荧光寿命 荧光强度 F= 2.3ФFIoεbc F—荧光强度；ФF—荧光量子产率，Io—照射到被测物质上的光强度；ε—该物质的摩尔吸光系数；b—检测池厚度；c—物质浓度 荧光量子产率 荧光量子产率与荧光强度的区别 荧光量子产率是荧光物质的固有属性 其与物质浓度无关 荧光强度与物质浓度有密切关系 同浓度下，荧光量子产率高的荧光越强（排出外界条件影响） 荧光寿命 荧光寿命（τ） lnFo-lnFτ=-t/τ Fo和Fτ分别代表t=0和t=τ时的荧光强度，通过实验测量不同时间的Ft值，确定lnFt—t的关系曲线，应为直线 直线斜率就是荧光寿命 用式子τ=10-5/εmax估计荧光寿命，εmax为最大吸收波长下的摩尔吸光系数，如S0-S1跃迁的ε值一般为103，估计荧光寿命是10-8s. 影响有机化合物荧光的有机试剂结构因素 分子共轭体系 共轭大π键共平面程度及其刚性 .取代基 影响 杂原子影响 分子离子化对荧光的影响 立体结构 分子共轭体系大小对荧光的影响 有机荧光团 能发射出荧光的共軛π键的基团 （-CH=CH-）n（n2），苯，萘，对苯二醌，苯并杂环、吡喃酮以及占吨酮基团 共轭体系越大，荧光量子强度越高 对于稠环芳烃，具有相同芳香环数的化合物，芳环的连接和排列顺序不同，化合物的有关荧光性能也不同 芳环直线性排列的化合物的荧光发射波长比非线性排列的波长要长 芳香环数越多，共轭体系越大，荧光越强 芳香环或共轭体系增加到一定程度，只是荧光发射波长向长波红移，ФF不再增加，还可能降低 共轭大π键共平面及其刚性的影响 有机分子具有共軛平面结构才显示出荧光特性 分子的共轭体系必须具备共平面性 共軛体系的平面结构还要有一定程度的刚性 取代基的影响 取代基种类的影响 取代基有推电子取代基和吸电子取代基 推电子取代基：-NH2、-NHR、-NR2、-OH、-OR（R=-CH3、-C2H5等 吸电子取代基：C=O、-NO2，-COOH，-CHO、-COR（R=-CH3，-C2H5等）、-N=N-、卤素（-F，Cl，Br，I）等 推电子取代基增强荧光 推电子取代基增强荧光 取代基中O或N上的孤对电子参与有机荧光分子的共轭大π键，扩大共轭体系 波长红移，荧光强度明显增加 极性溶剂中易形成氢键，强酸中易质子化，碱性介质中可离解出H 质子化试剂分子带正电，使荧光减弱 离解出H试剂分子带负电荷，荧光增强 吸电子取代基 减弱荧光 类取代基中的n电子跃迁到π*属于禁阻跃迁 ，激发态分子数较少 S1－T1的体系间跨越占优势，激发态分子放出光子的数大为减少，使荧光减弱 －CN氰基（-C≡N）是不饱和取代基，它应使取代的化合物荧光减弱，但实际结果是表现出推电子的效果—荧光增强 －F虽是吸电子取代基，但增强荧光 磺酸基含有不饱和键，表现出吸电子性能，应减弱荧光 但它易离解出H带负电荷，又体现出推电子的行为，使荧光增加 增减相低，磺酸根的引入一般无显著荧光变化，最明显的是试剂水溶性的增加 取代基数量及其所处位置的影响 对于不同的发光母体，同类取代基所处位置不同所表达的荧光强弱变化规律也不相同 小体积取代基所贡献的共轭效应小只是体现出其电荷影响 大的取代基如苯或乙炔基苯，其共轭效应大，取代后扩大共轭体系，荧光增强的效应大于其吸电子使荧光减弱的效应 结果是取代后的荧光强度不是减弱而是大大增强 两类取代基共同作用 推电子基和吸电子基共存时，推电子基结合在对于吸电子基共振电子密度减小的原子上，构成荧光性 7-羟基香豆素（ФF =0.37） 6-和8-羟基取代香豆素无荧光 4-甲基-7-羟基香豆素则因甲基的超共轭效应使荧光增强（ФF =0.41） 两个以上推电子基同时取代，化合物的荧光会受到抑制