实验一 显微镜的基本知识与使用.ppt

实验一 显微镜的基本知识及使用方法 一、目的要求 学习显微镜的原理、使用方法和保养。 利用显微镜观察微生物标本 学习显微数码系统的使用方法。 学习生物绘图。 三、实验材料 微生物染色装片标本。 显微镜、计算机、香柏油、二甲苯或乙醇乙醚混合液、擦镜纸等。 显微镜的构造 1、光学部分： 接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。 它使检视物放大，造成物象。 2、机械部分： 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 它起着支持、调节、固定等作用。 1、 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2、显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n· sin(α/2) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 3、数值孔径 N.A=n.sin（α/2） ①干燥系物镜? 以空气为介质，如常用的40×以下的物镜，数值孔径均小于1。 ②油浸系物镜? 常以香柏油为介质，此物镜又叫油镜头，其放大率为90×—100×，数值孔值大于1。 根据物镜放大率的高低，可分为： ①低倍物镜? 指1×—6×，NA值为0.04—0.15； ②中倍物镜? 指6×—25×，NA值为0.15— 0.40； ③高倍物镜? 指25×—63×，NA值为0.35—0.95； ④油浸物镜? 指90×—100×，NA值为1.25—1.40。 油镜使用的原理 增加照明亮度：油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 提高分辨率：香柏油（n=1.515）为介质时，其折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，从而增加数值孔径达到提高分辨率的目的。 （二）了解显微数码系统的使用方法 链接演示显微数码系统软件的使用方法 演示拍照的方法 图片保存要求 建文件夹： D:\环境0511班200522200**** 图片： 格式：JPG 文件名：环境200522200****大肠杆菌（ 10×100 ） （三）利用显微镜观察微生物标本 1、观察前的准备 2、低倍镜观察 3、高倍镜观察 4、油镜观察 5、镜检完毕后的处理 1、观察前的准备 （1）将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3－4cm。检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光亮度 （3）调节目镜及数值孔径大小 链接实验录相 2、低倍镜观察 将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方。 转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。 用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 链接实验录相 3、高倍镜观察 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在正常情况下，高倍物镜的转换不应碰到载玻片或其上的盖玻片。 若使用不同型号的物镜，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，使载物台下降，直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察。 链接实验录相 4、油镜观察 （1）升高镜筒，将油镜转至工作位置。在玻片标本区域滴加香柏油。 （2）从侧面注视，用粗调节器慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中几乎与