APT-第二步实验-阳离子纯化20150125精读.doc

APT-第二步实验-阳离子纯化 MMC 时间　层析柱规格 16*20 　介质名称 MMC Diamond 　层析介质量 30.8ml 　样品名称 DEAE (6HP 5峰 上样量 约32mg 样品处理 用Hcl调PH至6.0 　上样体积 45ml 程序如下： Time(min) B﹪ Flow(ml/min) Fracton(min/管） 0 0 2 2 45 0 2 2 46 5 2 2 170 80 2 2 BufferA：0.02mol/L PH 6.0 Tris-Hcl+0.1mol/L Nacl BufferB：0.02mol/L PH 6.0 Tris-Hcl+1mol/L Nacl 图谱如下： 效价检测结果如下： 样品名称 10ug聚集率% 2ug聚集率% 1ug聚集率% 粗毒 30ug/18.53 100 / / 空白 84.56 / / DEA上样液，0.506mg/ml 33.03/73.77 / / DEAE/MM流穿，0.43mg/ml 70.09 / / DEAE/MM38-50t，0.063mg/ml 76.07 / / DEAE/MM58-64t，0.081mg/ml 73.46 / / DEAE/MM65-71t，0.080mg/ml 77.4 / / 结果显示：收集峰与流穿峰均无效价。 时间　层析柱规格 16*20 　介质名称 MMC Diamond 　层析介质量 28.6ml 　样品名称 DEAE (6HP6峰 上样量 约21mg 样品处理 用HAC调PH至4.5 　上样体积 40ml 程序如下： Time(min) B﹪ Flow(ml/min) Fracton(min/管） 0 0 1.5 3 60 0 1.5 3 61 5 1.5 3 190 80 1.5 3 BufferA：0.02mol/L PH 4.5 NaAC-HAC+0.1mol/L Nacl BufferB：0.02mol/L PH 4.5 NaAC-HAC+1mol/L Nacl MMC层析 MMC样品 0.483mg/ml -4.94 絮团状物出现 MMC样品 10-32t，0.165mg/ml 84.19 　 MMC样品 38-53t，0.131mg/ml 86.62 　 MMC样品 55-70t，0.138mg/ml 　 　 时间　样品名称 DEAE (6HP6峰 图谱如下： MMC层析 MMC上样液 0.626mg/ml 1.63 絮团状物出现 MMC原样 0.616mg/ml -2.91 　 MMC-8-14t 0.186mg/ml 97.38 　 MMC-15-19t 0.161mg/ml 77.57 　 MMC-20-25t 0.164mg/ml 87.5 　 MMC-26-32t 0.140mg/ml 100 　 MMC-35-41t 0.146mg/ml 92.56 　 CM-FF 时间　层析柱规格 16*20 　介质名称 CM Bestarose FF 　层析介质量 24ml 　样品名称 DEAE (6HP 4-5峰 上样量 31.8mg 样品处理 用G-25柱交换HAC使 PH至4.5 　上样体积 55ml 程序如下： Time(min) B﹪ Flow(ml/min) Fracton(min/管） 0 0 1.5 3 60 0 1.5 3 61 5 1.5 3 190 80 1.5 3 BufferA：0.02mol/L PH 4.5 NaAC-HAC BufferB：0.02mol/L PH 4.5 NaAC-HAC+1mol/L Nacl 图谱如下： CM层析（DEAE-4,5峰上样） CM上样液 D-G25,0.356mg/ml 2.33；4.01 絮团状物出现 CM流穿 8-26t,0.129mg/ml -26.97 CM 31-33t,0.104mg/ml 78.8 　 CM 34-36t