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毕节小檗的两种同工酶分析 　　摘要：为探讨毕节小檗（Berberis guizhouensis）2个居群的遗传变异性和相似性，用聚丙酰胺垂直板凝胶电泳技术对毕节小檗2个居群的细胞色素氧化酶（COD）同工酶和过氧化物酶（POD）同工酶进行研究。结果表明，毕节小檗2个居群20株植株POD同工酶酶带数为8条，其中有4条共同酶带（POD-3、POD-5、POD-7、POD-8）；COD同工酶酶带数为7条，其中也有4条共同酶带（COD-3、COD-5、COD-6、COD-7）。不同居群的同工酶酶谱存在差异，同一居群的不同同工酶酶谱也存在差异；韭菜坪居群的分化程度大于艾家坪居群。 　　关键词：毕节小檗（Berberis guizhouensis）；细胞色素氧化酶；过氧化物酶； 同工酶分析 　　中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2264-03 　　小檗属（Berberis L.）植物全世界约有500种，主产北温带，中国有250多种，主要分布于西部及西南部[1]。贵州省有26种1个变种[2]，据初步调查，六盘水有24种1个变种[3]。其中，毕节小檗（Berberis guizhouensis）为贵州省特有小檗属药用植物[4]。小檗属植物俗称三颗针，主要含尖刺碱（Oxyacanthine）、小檗胺（Berbamine）、小檗碱（Berberine）、药根碱（Jatrorrhizine）、巴马亭（Palmatine）等生物碱[5]，具有抗菌消炎、清热解毒、降压、利胆、抗心律失常和抗癌等作用[6]。许多种类可作黄连、黄柏的代用品。 　　李红宁等[7]对金花小檗（Berberis wilsonae）、威宁小檗（Berberis weiningensis）及永思小檗（Berberis tsienii）的过氧化物酶（POD）同工酶进行了研究，关于毕节小檗同工酶的研究鲜见报道。同工酶作为基因表达的产物，是生物发生遗传分化的证据，在进化中具有一定的保守性，不仅可以用来揭示生物居群遗传学结构，了解种内、种间及种以上遗传多样性的情况，而且还可以用来判断其繁育系统的性质及生殖方式[8]。POD、细胞色素氧化酶（COD）同工酶属于氧化还原酶类，在植物中普遍存在，是生物的遗传标记，它的酶谱在一定条件下较稳定，对于品种鉴定，亲缘关系推断等具有一定的价值[9]。 　　本试验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对毕节小檗两个居群的过氧化物酶、细胞色素氧化酶同工酶进行了比较研究，探讨其居群间的遗传结构及多样性，旨在为小檗属植物的合理开发利用等方面提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　毕节小檗于2011年11月在贵州省西部的威宁县艾家坪和六盘水钟山区韭菜坪采集，其中艾家坪居群随机采集了12株植物（海拔2 250～2 300 m），韭菜坪居群随机采集了8株植物（海拔2 300～ 2 400 m）。凭证标本存放于六盘水师范学院生命科学系植物标本室。 　　1.2 方法 　　样品制备按照李红宁等[7]的方法，电泳按照孙爱群等[10]的方法。 　　过氧化物酶同工酶染色参照胡能书等[11]的联苯胺法：取联苯胺0.1 g，加入无水乙醇5 mL、1.5 mol/L乙酸钠10 mL、1.5 mol/L乙酸10 mL、蒸馏水75 mL、H2O2原液6滴，混合即为染色液。将电泳凝胶放入染色液中，置于37 ℃恒温培养箱中保温30～60 min即可。细胞色素氧化酶同工酶染液配方[12]为1%二甲基对苯二胺∶1% α-萘酚（溶于40%乙醇）∶0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.4） =1∶1∶25（体积比）。 　　染色后对酶带进行测量、记录和拍照，并计算其相对迁移率（Rf），Rf=酶带迁移距离（cm）/溴酚蓝迁移距离（cm）。以同工酶缩写名称的大写字母代表酶蛋白，以1、2、3表示向阳极迁移的位点，越靠近阳极的位点以越小的数字表示，如POD-1、POD-2等。 　　相似度指数=2个类群植物相同酶带数/（2个类群植物相同酶带数+2个类群植物不同酶带数）[13]。依据数量分类中二态特征的0/1编码原则[14]对每个个体的每条酶带赋值，首先将各样本看成一类，有酶带计为1，无酶带计为0，应用DPS v7.55软件中的Jaccard系数，用类平均法（UPGMA）对样品进行聚类分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 毕节小檗POD同工酶酶谱分析 　　经过分析，毕节小檗2个居群20株植株POD同工酶谱共有8条酶带（图1），其中有4条为共同酶带（POD-3、POD-5、POD-7、POD-8）。艾家坪居群酶带数为3～7条，韭菜坪居群酶带数为2～6条。韭菜坪居群的第3株植株无POD-8酶带。共同酶带在两居群中的表现特征为PO