白三叶叶片对酸沉降及冻融胁迫的生理响应特征.docVIP

白三叶叶片对酸沉降及冻融胁迫的生理响应特征 摘要：酸沉降及变温条件下，植物会对胁迫产生一定的生理响应。通过人工酸沉降，测定酸胁迫下白三叶在变温条件下叶片可溶性蛋白、丙二醛（MDA）及抗氧化酶活性的变化规律。结果表明，酸沉降胁迫下，叶片MDA、过氧化物酶（POD）、超氧化物酶（SOD）升高，分别升高0.60%～18.82%、10.34%～24.47%、0.09%～18.11%，而可溶性蛋白含量降低2.85%～24.18%，过氧化氢酶（CAT）活力变化趋势不明显；在融冻胁迫下，叶片抗氧化酶、可溶性蛋白随温度下降先增高后降低，最大值出现在-5 ℃，MDA呈上升趋势，pH组、CK组最大值均出现在-15 ℃，分别为4.04、3.97 μmol/L。在冻融胁迫下，POD随温度升高而上升，SOD和可溶性蛋白先升高后下降，CAT活力先下降后趋于平稳，MDA含量持续下降。白三叶通过快速激活抗氧化酶活力和积累丙二醛以抑制膜脂过氧化在酸沉降和冻融胁迫上的适应，是未来值得推广的园林绿色植物。 关键词：白三叶叶片；酸沉降；冻融胁迫；抗氧化酶；MDA 中图分类号：Q945.78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2083-04 白三叶草（Trifolium repens）属于豆科车轴草属，是多年生草本植物。其适应性强，耐寒、耐热、耐干旱，且分布范围广。它是一种优良的豆科牧草，被广泛应用于园林绿化和草坪建植，也是一种重要的绿肥植物，在发展园林绿化及园林生态建设上起重要作用[1-3]。 酸雨是指pH小于5.6的雨、雪或其他方式形成的大气降水[4]。近20年来，我国酸性气体造成的大气污染不断加剧。继北美、欧洲之后，中国已经成为世界第三大酸沉降区， 且酸雨区面积呈加速发展的趋势[5]。特别是中国北方地区，冬季供暖，加重了酸雨的侵蚀，已经对中国经济造成巨大损失[6，7]。同时，温度是主要影响白三叶草坪生长的环境因子，随着全球气温不正常变化导致的融冻型冻害，对园林景观也造成一定的损害[8]。 逆境条件下，植物往往容易产生较多的丙二醛（MDA），能与蛋白结合形成交联物，引起生物体大分子蛋白、核酸变化，从而改变细胞膜系统，因此通常用MDA评价植物质膜受损程度的指标；同时在胁迫条件下，植物会产生大量的活性氧合自由基，引起膜的过氧化和伤害，而过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）在清除活性氧自由基和防止膜脂过氧化维持膜完整性上起重要作用。为此，将通过酸沉降及冻融胁迫的方法，测量白三叶叶片可溶性蛋白、MDA、抗氧化酶（SOD、CAT、POD）在此过程中生理指标变化和冻融胁迫后恢复能力，以期了解白三叶对温度、酸沉降适应的生态幅，可为未来作物抗冻及防治酸沉降对草坪草的危害提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 白三叶 供试白三叶品种兰迪（Landy），由吉林省农业科学院提供。于2014年4月初挑选饱满粒大的种子，采用撒播方式，将种子播撒在吉林大学环境与资源学院室外试验田中（N 43°83′35.3″，E 125°28′75.2″）。试验田土壤有机质含量为32 g/kg，全氮1.012 g/kg，全磷0.428 g/kg，全钾21.55 g/kg，土壤平均pH 6.9。取表层土壤将白三叶种子覆盖，避免暴晒，播种初期定时人工浇水，待长出幼苗，减少浇水量及次数。尽量保证植物生长环境，如光照，湿度、温度、土壤组分等相同。 1.1.2 模拟酸沉降溶液 根据长春市天然降水pH及离子水平，考虑到天然降水离子成分的复杂性，选择自来水配制模拟酸沉降的原溶液，再用浓硫酸与浓硝酸（SO42-∶NO3- 5∶1）配制pH 4.5模拟酸沉降溶液[9]，进行模拟酸沉降淋浇，试验以自来水作为对照组（CK）。模拟酸雨pH由pHS-3C型雷磁酸度计测定与校对。 1.2 试验方法 1.2.1 酸沉降试验 将试验田分为2组，分别为pH组、CK组，每组面积大小为10 m×3 m，每组之间有2 m缓冲区。试验于2014年7月对pH组进行模拟酸沉降淋浇，周期为40-55 d，每8 d喷淋一次，喷淋时间为17：00～18：00，单次喷淋量相当于10 mm降雨量，选用塑料压力喷壶作为人工模拟降雨器，将配制溶液均匀喷至pH组内，通过调节壶内压力调节降雨强度，调节喷头控制酸雨雨滴大小。 1.2.2 人工冻融试验 于2014年9月，在试验田中分别从pH组、CK组中随机用撬铲取长、宽、深均为0.25 m的白三叶样品，各6份，标记好后将带有土壤及根系的试验材料从室外采样，送回实验室（15 ℃）过夜，第二天早晨开始融冻-冻融处理。融冻试验处理为每2 h降温5 ℃，一样的冻融试验为每2小时升温5 ℃，试验的温度设计为5、0、-5、-10、-15、-10、-5、0