白掌根茎腐病与苯丙氨酸解氨酶活性关系研究初报.docVIP

白掌根茎腐病与苯丙氨酸解氨酶活性关系研究初报 摘要：在白掌抗病种S.can血folium和白掌感病种s‘Parrish’上接种根茎腐病病原菌，测定接种2.3.4.5、7、9天后苯丙氨酸解氨酶活性的变化。结果表明：①感病品种本身PAL酶活性高于抗病品种；②抗病品种经病原菌侵染后PAL酶活性高于对照组，酶活性发生极显著性差异；③感病品种经病原菌侵染后Pal酶活性较高于对照组，酶活性发生显著性差异；④病原菌侵染后，抗病品种除第4天外PAL酶活性均大于感病品种。其中接种后在第3、5天PAL酶活性和净增加值达到峰值。感病品种接种病原菌后PAL酶在第4天PAL酶活性和净增值达到峰值 关键词：白掌；根茎腐病；苯丙氨酸解氨酶 白掌为天南星科白鹤芋属的一种多年生草本植物，是一种优良的室内观赏植物，天南星帚梗柱孢（Cylindroeladium spathiphylli）引起的根茎腐病，是一种极其严重的真菌病害，发病率高，致病性强。 植物抗病反应是一个复杂的代谢过程。超氧化物歧化酶（Su-peroxide dismutase，SOD）、过氧化物酶（Per-oxidase，POD）、过氧化氢酶（Catalase，CAT）、多酚氧化酶（Polyphenolox-idase，PPO）和苯丙氨酸解氨酶（Phew-lalanine ammonialyase，PAL）等是植物体内重要的一些防御酶，参与活性氧清除及酚类、木质素和植保素等抗病相关物质的合成，能抵御活性氧及氧自由基对细胞膜系统的伤害，增强植物对病害的抵抗能力。PAL是连接生物初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步反应的酶，是苯丙烷类代谢途径的关键酶和限速酶。PAL存在于所有绿色植物中，真菌、藻类和细菌中也同样存在。PAL与植物的抗病性直接相关，植物受病菌侵染后，通常PAL酶活性有所提高，同时随木质素、绿原酸等抗菌物质合成的增加，在植物抗病过程中起着化学屏障作用，本研究分别在白掌的抗病品种和感病品种上接种病原菌，之后对根部PAL酶的变化进行了初步的研究，旨在了解白掌根茎腐病发病过程中植株体内PAL酶的变化与其抗病性的内在联系，为进一步全面揭示白掌根茎腐病感病机制提供参考。 1 材料与方法 1.1 供试材料 感病品种：S.‘Parrish’抗病品种：S.cannifolium。 1.2 供试菌 根茎腐病病原菌：由广东省农业科学院环境园艺研究所观赏植物中心分离所得。 1.3 病原培养基的配制 马铃薯100g；葡萄糖5g；琼脂8.5g；水500mL。马铃薯洗净去皮，切块称取100g，称取葡糖糖5g，琼脂8.5g，马铃薯倒入锅中加入500mL自来水，煮沸20分钟，倒出用纱布过滤，加入琼脂，加热使其充分溶解，再加入葡糖糖混合均匀后补足到500mL，灭菌锅灭菌20分钟。 1.4 病原菌的活化 在无菌条件下用接种环挑取菌丝在PDA培养基上，6～7天用刀片刮伤菌丝，促进孢子产生，再过7天刮下孢子用无菌水配成105个孢子/ml孢子悬浮液待用。 1.5 接种与培养 用注射器注射50mL孢子悬浮液灌于植株根部，放人人工培养箱培养。光照/黑暗各12小时，温度22～28℃。保持盆土湿润，不加悬浮液为对照。 1.6 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性测定 于接种后第2、3、4、5、7、9天分别取材1次，共6次。取材是把植株的根部全部取下，每次每品种取4株，洗净、擦干、剪碎、混匀。保存在低温冰箱（-80%）中待测。 1.6.1 酶液提取：取材料0.5g，加液氮研磨至粉末状，加聚乙烯吡咯烷酮PVP 0.05g混匀，转入装有5mM巯基乙醇硼酸缓冲液（pH值8.8）2mL的离心管，离心（10000r/min，15rain，4℃），上清液即为酶液，取样枪取出上清液，放入5mL离心管，剩余物加少量缓冲液冲洗后，再次离心（10000r/min，10min），取上清液，如此重复3次，直到酶粗提液补足5mL，将酶液放入4℃冰箱中保存备用，重复取材3次。 1.6.2 活性测定：取酶液0.2mL，0.02mL-苯丙氨酸1mL及pH值8.8的硼酸缓冲液2mL，作为反应体系，以0.2mL蒸馏水+1mL 0.02mL-苯丙氨酸+2mL pH值8.8的硼酸缓冲液作为对照，摇匀后转入石英比色皿中，立即在分光光度计（uV-2102 PCS）上测定起始0D290值，并精确计时，然后各测定液倒回试管于37℃，恒温水浴锅中保温30min，冰浴中停止反应，再转入石英比色皿测定0D290值，将第2次测得的0D290值减去第1次测得的0D290值，可得到反应的酶活性。以每小时在290nm处吸收变化0.01所需酶量为一单位，相当于每1mL反应液中形成1txg肉桂酸。 PAL活性 A290×V（a×0.01×w×t） 公式中：V为提取粗酶液总体积，a为测定时取用粗酶液体积，