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第11章 DNA重组与转座 一、名词解释： 1. DNA重组（遗传重组） 2. 同源重组 3. 转座 4. 复制性转座 5. 非复制性转座 6. 反转座子 二、简答题： 1、简述RecA、RecBCD的作用及细菌同源重组的机制。 2、试述转座的机制和遗传学效应。 3、基因敲除技术是如何操作的。 4、简述基因重组的概念和意义。 5、解释细菌的转化与转导。 6、简述特异性位点重组与同源重组的区别。 7、转座子的特征有哪些方面？ 三、思考题： 什么是同源重组的Holliday 模型？ 答案： 名词解释： DNA重组（遗传重组）：是指由于不同DNA链的断裂和连接而产生的DNA片段的交换和重新组合，形成新的DNA分子的过程。 同源重组：两个DNA分子同源序列之间进行的重组 转座：由可移位因子介导的遗传物质重排的现象。 复制性转座：整个转座子被复制，所移动和转位的仅仅是原转座子的拷贝。 非复制性转座：转座子作为一个可移动的单位直接被移位，留下一个供体位点（通常产生一个双链断裂的缺口）。 反转座子：转座经过RNA阶段。 DNA元件转录成RNA，再逆转录为DNA，然后插入基因组中某一新位点。 ’端切口的ssDNA被recA蛋白包裹形成recA蛋白-ssDNA细丝；RecA-ssDNA 细丝寻找相对的DNA双螺旋上的相应序列。（4）游离端交叉连接，形成Holliday 结构；（5）通过分支迁移产生异源双链DNA。（6）空间重排。十字型两臂旋转180度； （7）解离 两种不同方式 （8）修补连接 2、试述转座的遗传学效应。 答案要点：（1）可引起基因突变——插入或切离；（2）可以产生新基因；如携带抗药性基因的转座子，既可引起插入突变，也使该位点产生抗药性。（3）转座产生染色体畸变（缺失、倒位等）（4）产生新的变异，有利于进化。 3、基因敲除技术是如何操作的。 答案要点：（1）构建重组基因载体（2）用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内,基因敲除的靶细胞目前最常用的是小鼠ES细胞 （3）用选择培养基筛选已击中的细胞（4）转入假孕母鼠使其生长成为转基因动物，对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。 4、简述基因重组的概念和意义。 答案要点：A、概念：是指由于不同DNA链的断裂和连接而产生的DNA片段的交换和重新组合，形成新的DNA分子的过程。B、意义：重组是遗传学的灵魂，没有重组就没有生物的进化；没有重组也就没有现代的分子克隆技术。 5、解释细菌的转化与转导。 答案要点：转化是通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型；转导是当病毒从被感染的细胞（供体）释放出来，再次感染另一细胞（受体） 时，发生在供体细胞与受体细胞之间DNA转移及基因重组。 6、简述特异性位点重组与同源重组的区别。 答案要点：① 同源重组中DNA链的切断是完全随机的；位点特异性重组是在某些特异的DNA序列处发生重组。② 同源重组后染色体内的DNA序列一般仍按原来的顺序排列；位点特异性重组中DNA片段的相对位置发生了移动，即DNA序列发生重排，从而得到不同的结果。 7、转座子的特征有哪些方面？ 答案要点： 不依赖供体序列与靶位点间序列的同源性，不依赖recA 转座后靶序列重复 转座插入专一型 某些转座因子（Tn3）对同类转座因子的插入具有排他性 转座有极性效应 活化临近的沉默基因 区域性优先 思考题： 什么是同源重组的Holliday 模型？ 答案要点：基因重组的模型都必须解释异源双链的形成以及基因转变往往伴随着两侧基因重组这一现象。1964年美国学者Robin Holliday提出了著名的Holiday模型。它的形成过程如下： 1、同源的非姊妹染色单体联会； 2、同源非姊妹染色单体DNA中两个方向相同的单链，在DNA内切酶作用下，在相同位置被切开； 3、切开的单链交换重接； 4、形成交联桥结构； 5、交联桥靠拉链式活动沿配对DNA分子移动；其中互补碱基间形成的氢键从一条亲本链改为另一条亲本链，于是形成大段异源双链DNA，称为Holliday结构； 6、6和7结构相同； 8、链绕交联桥旋转180度； 9、形成Holliday结构的异构体； 10、依两种方式被切断；