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蝴蝶兰外植体诱导分化与培养基筛选技术研究 　　摘要 以蝴蝶兰的花梗为外植体，采用不同的培养基进行诱导分化、增殖生根试验。结果表明：蝴蝶兰诱导培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+花宝1号1.0 g/L+柠檬酸30 mg/L、分化培养基MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+椰子汁10%+柠檬酸30 mg/L、生根培养基1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.3 mg/L+柠檬酸30 mg/L是筛选的最合适的培养基。 　　关键词 蝴蝶兰；外植体；诱导；分化；培养基 　　中图分类号 S682.31 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）08-0162-02 　　蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰属多年生草本植物，其株型美观，枝叶繁茂，花朵硕大，形状奇特，色彩艳丽且开花期长，观赏价值极高，是目前兰科植物中栽培最广泛的种类之一，深受民众喜爱，被誉为“兰中皇后”，同时也是室内绿化美化的新型观赏花卉，具有较高的经济价值和观赏价值。现以蝴蝶兰花梗为外植体，采用不同的培养基进行诱导分化、增殖生根试验，为优良蝴蝶兰品种的选育提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试材料选自温室栽培蝴蝶兰植株，选取健壮、无病虫害植株的花梗。试验用品与仪器包括75%酒精、0.1%升汞、洗洁精、无菌水、灭菌三角瓶、剪刀、解剖刀、镊子、无菌培养皿、超净工作台。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 材料的清洗和消毒。试验材料先用自来水冲洗5 min，然后用洗洁精清洗，再用自来水冲洗30 min。清洗过的材料放入超净工作台，用75%酒精浸泡30 s，再用0.1%升汞溶液浸泡13 min，最后用无菌水冲洗4～6次，最后把材料置于无菌滤纸上吸干水分。这样可使污染率低至5%以下，成活率达到97%以上。 　　1.2.2 接种。将消过毒的试验材料放入已经灭菌的培养皿中进行切割，切取2～3 cm长带芽节段，每节距侧芽上部1 cm、下部2 cm，并将侧芽苞叶剥去。使用高压灭菌锅灭过菌的玻璃瓶，揭去封口膜，把瓶口置于酒精灯火焰上烘烤数秒钟，并将材料放入玻璃瓶，再次烘烤数秒，然后迅速用封口膜封严[1]，放入冰箱，进行低温冷冻，分别处理12、24 h，最后移入培养室进行培养（所有操作器械在每次使用后均需消毒1次）。 　　1.2.3 培养基选择。花梗芽的诱导与分化使用的基础培养基分别为MS、VW和1/2MS。采用不同质量与浓度的植物生长调节剂配制的培养基，分别进行诱导与分化增殖，不同培养基对于试验材料产生不同的效果，筛选出以下几种培养基（蔗糖20 g，琼脂粉6.0 g，pH值5.6～5.8）。①诱导培养基：MS+6-BA 3.0 mg/L+花宝1号1.0 g/L+柠檬酸30 mg/L（A）、VW+6-BA 3.0 mg/L+花宝1号1.0 g/L+香蕉泥100 g/L+柠檬酸30 mg/L+活性炭1.0 g/L（B）、VW+6-BA 5.0 mg/L+花宝1号1.0 g/L+香蕉泥100 g/L+柠檬酸30 mg/L+活性炭1.0 g/L（C）。②分化培养基：MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+椰子汁10%+柠檬酸30 mg/L（D）、VW+NAA 0.3mg/L+香蕉泥100 g/L+柠檬酸30 mg/L（E）。③生根培养基：1/2VW+NAA 0.3 mg/L+柠檬酸30 mg/L（F）、1/2MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.3 mg/L+柠檬酸30 mg/L（G）、1/2MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.4 mg/L+柠檬酸30 mg/L+椰子汁95 mL/L（H）。 　　1.2.4 培养条件。培养温度（25±2） ℃，光照强度2 000～3 000 lx，光照时间12 h/d。 　　2 结果与分析 　　2.1 培养基的筛选与比较 　　花梗芽的诱导与分化使用的基础培养基分别为MS、VW和1/2MS。其中，诱导试验过程中A培养基外植体诱导表现突出，出芽率达到90%，出芽最早，萌动只需12 d，形成营养芽需2个多月；分化培养基中，D培养基最适合营养芽分化再增殖，其分化出的丛生芽，芽数多，生长快，健壮，无畸形，且都能生长为小苗；生根培养基中，G培养基能使小苗生长健壮，叶色正常，既没有添加椰子汁，也没有添加香蕉泥，是筛选出的经济且实用的培养基。由此表明，采用不同质量与浓度的植物生长调节剂配制的培养基，分别进行诱导与分化增殖，不同培养基对于试验材料产生不同的效果[2]，MS、VW 2种基础培养基均可作为诱导培养基，但添加不同质量浓度的激素和添加物可以诱导出不同的植物组织器官。 　　2.2 不同浓度的外源激素对花梗芽增殖和生长的影响 　　激素是培养基中