HPLC测定黄连上清片中黄芩苷的含量.docVIP

HPLC测定黄连上清片中黄芩苷的含量 　　【摘 要】建立反相高效液相色谱法测定黄连上清片中黄芩苷的含量。黄芩苷具有抗菌抗病毒、镇痛、抗肿瘤、清除氧自由基、抗炎、抗氧化、保护心脑血管及神经元、解热、保肝等作用。方法：采用奥泰公司 C18 色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）为流动相，检测波长为315nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。黄芩苷在5～30μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。黄芩苷平均回收率分别为100.1%。结论：本法简便、准确，可用于黄连上清片中黄芩苷的含量测定。 　　【关键词】黄连上清片；含量；测定 　　黄连上清片由菊花、连翘、蔓荆子（炒）、大黄、栀子（姜制）、黄芩、薄荷、黄柏（酒炒）、防风等组成。黄连上清片常用于内热火盛引起的头晕脑胀、口舌生疮、暴发火眼、大便干燥、小便色黄等。黄芩常用于湿温发热、胸闷、口渴不欲饮，以及湿热泻痢、黄疸等症[1-3]。《本经》记载：“主诸热黄疸，肠僻，泄利，逐水，下血闭，（治）恶疮，疽蚀，火疡。”黄芩含黄芩素（baicalein）、黄芩新素（neobaicalein）、汉黄芩素（wogonin）、7-甲氧基黄芩素（7-methoxbaic alein）、2，5，8-三羟基-7-甲氧基黄酮、黄芩苷等成分[4-6]。高效液相色谱法以液体为流动相，将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱，从而实现对试样的分析。文采用高效液相法，又根据本实验采用高效液相色谱法对黄连上清片中的黄芩苷的进行了含量测定。 　　1.仪器与试药 　　（1）仪器：SY-8100高效液相色谱仪（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；SPECORD250 PLUS紫外可见分光光度计（德国耶拿分析仪器股份公司）；KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；AE224 全触屏电子天平（海舜宇恒平科学仪器有限公司）；PH-620高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）。 　　（2）色谱柱：奥泰公司 C18 色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。 　　（3）对照品：黄芩苷。 　　（4）试剂：甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水，其它试剂均为分析纯。 　　（5）试药：黄连上清片。 　　2.测定方法确定 　　2.1色谱条件 　　依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：水-甲醇-磷酸（50：50：0.01）为流动相，检测波长：315nm，流速：1.0ml?min-1。柱温：30℃。理论板数按黄芩苷峰计算应不得低于2000。 　　2.2对照品溶液的制备 　　精密称取黄芩苷对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含10μg的溶液，即得。 　　2.3供试品溶液的制备 　　取装量差异项下的供试品精密称定，研细，精密称取（相当于黄芩苷100μg），置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。 　　2.4 专属性试验 　　依照处方取除黄芩，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在黄芩苷出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。 　　2.5 精密度试验 　　精密称取黄芩苷对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为10μg?mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.63%，表明本方法精密度良好。 　　2.6对照品的线性考察 　　精密称取适量黄芩苷对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含5、10、15、20、25、30微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，黄芩苷在5～30μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。 　　2.7重现性试验 　　称取同一批的黄连上清片样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.81%，结果表明此方法的重现性良好。 　　2.8准确度试验 　　取对照品适量， 按处方比例及工艺规程制备模拟片各20片，含量分别相当于标示量的80%、100%、120%。取模拟片照“含量测定”项下方法试验， 计算回收率为 100.1%，RSD为0.69%。 　　2.9 最低检出限与定量 　　采用2.1项下色谱条件，对样品测定，当信噪比为10时，定量限为1.5ng；当信噪比为3时，最低检出限为0.4ng。 　　2.10样品稳定性试验 　　取同一批黄连上清片样