第一章 微生物的纯培养与显微技术201508.pptVIP

* 微 生 物 学 * 微生物的定义 微生物是指形体微小、结构简单、肉眼看不见、进化地位低下的生物的总称。 * 小 与动物、植物细胞大小的差异； 单细胞或简单的多细胞。 微生物的基本特点： 借助显微镜观察 肉眼分辨能力：0.25mm 微生物的主要特点1 * 1、体积小、结构简单 μm:细胞型 nm: 非细胞型 “我家里的几位女眷想要看醋里的线虫，可是看了以后，厌恶地发誓说再也不用醋了。”要是我告诉她们在口腔里牙垢上生活的动物比全国的人口还多，她们将会怎样反应呢？ Leeuwenhoek * 第一章 微生物的纯培养与显微技术 微生物学发展与微生物学技术的关系： 列文虎克、巴斯德、科赫 微生物学的基础实验技术 显微技术 纯种分离与培养技术 无菌技术 染色技术 做 看 显微技术 * 一、显微技术 决定显微镜观察效果的因素 分辨率：最小可分辨距离 反差：样品区别于背景的程度 波长 振幅 * 显微镜的种类 电子显微镜 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 光学显微镜 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 * 分辨率是决定观察效果最重要的指标 0.5 lλ 分辨率= ———— n sin θ n∶玻片与物镜间介质的折射率 空气 (n=1.0)； 水 (n=1.33)； 香柏油 (n=1.52)； 玻璃 ( n=1.54) * 光学显微镜原理 θ :物镜镜口角的一半 n sin θ：数值孔径 （numerical aperture） 其数值越大，显微镜分辨率越好。 * 观察细菌应使用油镜 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 * 光学显微镜物镜的特性 在对细菌、放线菌等进行光学显微镜观察时，油镜最常使用，也最为重要。 * 光学显微镜能观察到的最小生物是( ) 。2012年全国生物联赛试题 A．酵母 B．植物细胞 C．细菌 D．噬菌体 绝大多数细菌的直径为：(? ? ) 2008年全国生物联赛试题?? A 1～10毫米???? B 1～10微米???? C l～l0纳米?? D l0毫米以上 答案：C 答案：B * 提高数值孔径的途径 增大透镜直径，以增加镜口角； 不实用 增加折射率； 采用短波长的电磁波 * 电子显微镜 光学显微镜 (? = 550 nm) 的分辨率为 220 nm。电子的波长比可见光小1000倍。 透射电镜 扫描电镜 * 光学显微镜观察样品的制备和染色 微生物无色透明，与背景折光率相差无几，染色可增强反差 染色前需固定 显微镜下观察到细菌的大小受固定方法影响 * 固定的方法 使蛋白质变性 加热 化学试剂：乙醇、醋酸、甲醛、戊二醛 保持细胞原来的形态，防止变形 * 二、微生物的纯培养技术 从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。 无菌技术 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染 * 微生物培养的常用器具及其灭菌 常用的器具：试管、瓶子、培养皿等 * 琼脂和Petri dish * 灭菌的方法 物理方法 化学方法 最常用的是高压蒸汽灭菌法 * * * * * * * *