酶工程 第三章 酶生物合成法生产 2013-2.ppt

酶的生物合成（biosynthesis） 通过细胞的生命活动合成各种酶的过程 酶的生物合成法生产 经过预先设计，通过人工操作，利用微生物、植物及动物细胞的生命活动，获得所需酶的技术过程，称为酶的生物合成法生产 第一节 细胞的选择 优良产酶细胞应具备的条件 （1）酶的产量高 （2）容易培养和管理（生长速率高、营养要求低） （3）产酶稳定性好，不易退化 （4）利于分离提纯 （5）安全可靠，无毒性 一、微生物 一、微生物 微生物酶的种类 大众工业用酶：淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、脂肪酶、植酸酶、纤维素酶和木聚糖酶 一、微生物 1、大肠杆菌（Escherichia coli） 谷氨酸脱羧酶：测定谷氨酸含量或用于生产γ—氨基丁酸 天冬氨酸酶：催化延胡索酸加氨生产L-天冬氨酸 青霉素酰化酶：用于生产新的半合成青霉素或头孢霉素 天冬酰胺酶：对白血病具有显著疗效 β-半乳糖苷酶：用于分解乳糖或其他β-半乳糖苷 限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、核酸外切酶等：在基因工程等方面广泛应用。 一、微生物 2、枯草杆菌（Bacillus subtilis） 枯草芽孢杆菌是应用最广泛的产酶微生物 α-淀粉酶 蛋白酶 β-葡聚糖酶 5’-核苷酸酶 碱性磷酸酶 一、微生物 3、链霉菌（Streptomyces） 葡萄糖异构酶：主要生产微生物 青霉素酰化酶 纤维素酶 碱性蛋白酶 中性蛋白酶 几丁质酶 16α羟化酶：可用于甾体转化 一、微生物 4、黑曲酶（Aspergillus niger） 可用于生产多种酶，有胞外酶也有胞内酶 糖化酶 α-淀粉酶 酸性蛋白酶 果胶酶 葡萄糖氧化酶 过氧化氢酶 核糖核酸酶 脂肪酶 纤维素酶 橙皮苷酶 柚苷酶等。 一、微生物 5、米曲霉（Aspergillus oryzae） 糖化酶和蛋白酶的活力：传统的酒曲和酱油曲的制造中广泛应用 氨基酰化酶 磷酸二酯酶 果胶酶 核酸酶P 一、微生物 6、青霉菌（Penicillium） 产黄青霉（Penicillium chrysogenum） 葡萄糖氧化酶 苯氧甲基青霉素酰化酶 果胶酶 纤维素酶 桶青霉（Penicillium cityrinum） 5’-磷酸二酯酶 脂肪酶 葡萄糖氧化酶 凝乳蛋白酶 核酸酶S1 核酸酶P1 一、微生物 7、木霉（Trichoderma） 纤维素酶：重要生产菌株，包含有Cl酶、Cx酶和纤维二糖酶等。 17-α羟化酶：常用于甾体转化。 一、微生物 7、根霉（Rhizopus） 糖化酶 α-淀粉酶 蔗糖酶 碱性蛋白酶 核糖核酸酶 脂肪酶 果胶酶 纤维素酶 半纤维素酶 11-α羟化酶：用于甾体转化的重要菌株。 一、微生物 9、毛霉（Mucor） 蛋白酶 糖化酶 α-淀粉酶 脂肪酶 果胶酶 凝乳酶 一、微生物 10、红曲霉（Monascus） α-淀粉酶 糖化酶 麦芽糖酶 蛋白酶 一、微生物 11、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 主要用于啤酒、酒类的生产 转化酶 丙酮酸脱羧酶 醇脱氢酶 一、微生物 12、假丝酵母（Candida） 脂肪酶 尿酸酶 尿囊素酶 转化酶 醇脱氢酶 17—经化酶：可以用于甾体转化。 二、植物细胞 主要用于色素、药物、香精和酶等初级代谢产物的生产。 三、动物细胞 动物细胞培养主要用于生产疫苗、激素、多肽、酶等 酶：纤溶酶原激活剂（tPA）、胶原酶、尿激酶等。 产酶细胞 人黑色素瘤细胞 中国仓鼠卵巢细胞（CHO） 小鼠骨髓瘤细胞 牛内皮细胞 第二节 培养基的配制 培养基（culture medium）是指人工配制的用于细胞培养和发酵的各种营养物质的混合物。 一、培养基的基本成分 1、碳源（carbon source） 能为细胞提供碳素化合物的物质。 细胞构成、酶的组成，也提供能源 微生物：淀粉、糊精、淀粉水解糖、麦芽糖、葡萄糖 植物细胞：蔗糖 动物细胞：谷氨酰胺、谷氨酸 2、氮源（nitrogen source） 向细胞提供氮元素的营养物质。 蛋白质、核酸、酶的组成成分。 有机氮：蛋白质及其水解物，如蛋白胨、酵母膏等。 无机氮：含氮的无机物，如氨水、硫酸铵等。 动物细胞：氨基酸、蛋白胨等有机氮 植物细胞：铵盐、硝酸银等无机氮 微生物： 异养型：有机氮 自养型：无机氮 3、无机盐（inorganic salt） 是提供细胞生命活动所必不可缺的各种无机元素，并对细胞内外的pH、氧化还原电位和渗透压起调节作用。 大量元素(≥0.5mmol/L) ： P ，S ，K，Na，Ca，Mg，Cl等元素 微量元素(≤ 0.5mmol/L) ： Cu， Mn， Zn， Mo ，Co，B，I 4、生长因素（growth factor） 即生长因子，是