中药药理设计实验紫菀祛痰讲解.pptVIP

1.了解酚红从呼吸道排泄的方法。 2.观察紫菀及其炮制品种蜜紫菀在小鼠祛痰的作用上的优劣。 实验目的 小鼠腹腔注射酚红后，酚红可部分经支气管粘液腺分泌入气道，有祛痰作用的药物在使支气管分泌液增加，因而可从药物对气管内酚红排泌量的影响来观察其祛痰作用。酚红在碱性溶液中呈红色，故以碱液清洗气管后可用比色法（分光光度计）测出酚红的排泌量。从而得出药物的祛痰作用。 实验原理 材料与动物 器材：注射器、小试管、试管架、手术器材、蛙板、大头针、722分光光度计? 药品：100%紫菀煎液、 100%蜜紫菀煎液、0.5%酚红溶液、5%NaHCO3、生理盐水。 动物：小白鼠12只（体重18~22g，雌雄各半） 方法与步骤 1.取小鼠12只，随机分成3组,每组4只，禁食不禁水8～12h，第一组按0.2ml/10g体重灌胃100%紫菀煎液，第二组按0.2ml/10g体重灌胃100%蜜紫菀煎液，对照组给予同等剂量的生理盐水，45min后腹腔注射酚红0.5ml，15min后脱颈椎处死，仰位固定于蛙板上手术分离气管。 2.用1ml注射器吸取0.5mlNaHCO3　,推注入气管内，反复连续推抽3次灌洗呼吸道，洗出液收集在试管中，按上述方法重复3次。 3.洗出液沉淀或离心，用722型分光光度计 （波长546nm），直接测浓度，计算祛痰指数，与对照组比较。 附注 1.小鼠呼吸道的分离与冲洗 将小鼠仰位固定于蛙板上，剪开颈前皮肤，分离气管，于喉头下将8号针头插入气管内约0.3cm，用丝线由气管下结扎固定后，用1ml注射器吸取5%NaHCO3 1ml，通过针头来回灌洗呼吸道3次，最后一次将灌洗液抽出注入试管中。按上述方法连续操作3次，冲洗共9次，收得灌洗液约3ml，置于试管中，静置或离心后取上清液，用分光光度计检测浓度，与对照组比较。 2.酚红标准液的配制 用电子天平准确称取一定量的酚红，以5%NaHCO3溶解，使每1ml含酚红1000μg。然后依次稀释，配成每ml含1.0、3.0、5.0、10.0μg，用722型分光光度计测定，取其中1～2个浓度作为标准测定管。 计算公式： 实验结果 祛痰指数（%）=　 给药组浓度 对照组浓度　　　　　　　　　　　　　　　　　 ×100% 实验结果 组别 第一组 第二组 对照组 药物 100%紫菀水煎液 100%蜜紫菀水煎液 生理盐水 动物数（只） 剂量 （ml） 浓度 （?μg/ml） 祛痰指数 （%） 注意事项 给药至处死动物的时间必须准确。 解剖时，须将气管周围组织去除干净，气管段周围如果粘附有血液应立即用滤纸吸净。 呼吸道冲洗时，NaHCO3用量要准确，灌洗时动作要轻，以免穿破气管和肺脏，抽推速度也尽可能相同，并尽可能将洗液抽尽。