食品中AA的检测方法.doc

食品中AA 的检测方法 婴幼儿配方食品和乳粉AA的测定 范围 本标准规定了用气相色谱法测定AA的方法。 本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中AA含量的测定。 方法提要 抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气象色谱、火焰离子化检测器定量测定样品中AA的含量。 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1高峰氏淀粉酶（Taka-Diastase）。 3.2氨水：体积分数≤25％。 3.3乙醇：体积分数≥95％。 3.4乙醚。 3.5石油醚：沸程，30-60℃。 3.6正己烷：色谱纯。 3.7氢氧化钾的甲醇溶液:c KOH 4mol/L,使用无水甲醇。 3.8标准溶液 3.8.1标准贮备液：准确称取一定量的AA甲酯标准品（Sigma公司，GC,99％）3.8.2标准工作液：取标准贮备液1.00mL，用正己烷稀释并定容至5mL，AA浓度约为0.6mg/mL，使用前配制，以防止溶剂挥发而使浓度改变。 4仪器和玻璃器皿 常用实验室仪器及： 4.1毛氏抽脂瓶。 4.2离心机。 4.3水浴锅。 4.4振摇器。 4.5气象色谱仪。 4.6火焰离子化检测器。 4.7色谱柱，毛细管柱，BPX-70,25m×0.22mm, 70％ Cyanopropy equiv polysilphenyleysiloxane。 5 5.1样品处理 5.1.1含淀粉样品 准备称取1.0000 g样品，置于毛氏抽脂瓶（4.1）中，加入0.1 Taka淀粉酶（3.1），再加入10mL45～50℃45℃烘箱内30min，取出冷却至室温。 5.1.2不含淀粉样品 准备称取1.0000 g，置于毛氏抽脂瓶（4.1）中，用10mL65℃的蒸馏水溶解，振摇，使样品完全分散，水冷至室温。 5.2测定液的制备 5.2.1于上述样品溶液中加入2mL体积分数为25％氨水（3.2），置于65℃水浴（4.3）中15min，取出，轻摇，冷至室温。 5.2.2加入10mL乙醇（3.3），混匀。加入25mL乙醚（3.4），塞上塞子振摇1 min。加入25mL石油醚（3.5），塞上塞子振摇1 min。再加入25mL石油醚，塞上塞子振摇1 min。离心或静止，使醚层、水层分开。有机层转入烧瓶中。第二次提取加入的试剂为5mL乙醇，15mL乙醚、15mL石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醇，只用15mL乙醚、15mL石油醚，如上操作。 5.2.3把提取的醚液合并，减压浓缩至近干，用正己烷（3.6）溶解残留物并定容至10mL，摇匀。准确吸取2 mL此液于10mL带盖离心管中，加入0.2 mL氢氧化钾的甲醇溶液（3.7），振摇1 min以上，放置10min（甲基化反应）。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。 5.3测定 5.3.1测定条件 a 进样器温度：250℃； b 检测器FID温度: 250℃； c 进样体积：0.5μL； d 灵敏度：10-1 e 衰减：102; f 氮气流速：35mL/ min；氢气流速：2mL/ min；空气流速：10mL/ min； g 柱温：程序升温120℃保持1 min，再5℃/ min升温至240℃，保持5min。 5.3.2定性测定 根据保留时间定性。改变色谱条件，如柱温度、载气流速，使标准品AA的保留时间发生改变。如果样品中的某个峰随标准品中的AA峰的保留时间有同样的改变，即证明样品中含有AA。 5.3.3定量测定 外标定量法。 注射一定量的标准工作液进入气象色谱仪，得到AA的峰面积A；注射等体积的样品待测液进入气象色谱仪，得到样品中AA的峰面积B。 6分析结果的表述 样品中AA的含量（mg/100g）100BCV/AM 式中： B—样品中AA的峰面积； C—标准样中AA的质量浓度，mg/mL； V—待测样品总体积，mL； A—标准工作液中AA的峰面积； M—样品的质量，g。 7允许差 同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10％.