顶空气相色谱法检验血液中乙醇含量.docVIP

顶空气相色谱法检验血液中乙醇含量 　　【摘 要】 本文采用顶空进样方法，通过改进色谱条件，改进数据处理方式，从而建立一个改进的血液中乙醇的检验方法，以获得更好的分离效果和线性关系，解决实际应用中存在的同一个样品无法重复进样，标样存储和取用的问题。 　　【关键词】 内标曲线法 顶空气相色谱 血液中乙醇 相对标准偏差 　　乙醇广泛存在于日常饮用的各种饮品中，可以说是涉及人数最多、应用范围最广、滥用程度最高的一种毒（药）物。长期过量饮酒或慢性酒精中毒可诱发或导致心脑血管疾病、消化系统疾病、精神障碍等多种疾病，甚至导致死亡。饮酒后人的中枢神经活动会变得迟钝，致使手足活动迟缓、生理机能减退、视力听力等感知能力降低，还会导致行为异常，从而发生意外甚至犯罪，比如车祸、吸入呕吐物窒息而死、酒后肇事等[1]。酒后驾驶更是一直以来困扰我们的世界性的社会问题，是造成交通肇事的主要原因[2]。血液中乙醇含量（blood alcohol concentration，BAC）的检验在判定饮酒后驾车、饮酒后违法犯罪、饮酒中毒死亡等案事件中起到十分重要的作用。 　　现阶段对于血中乙醇含量的检测方法主要有化学法、光谱法、电池法、酶学法和气相色谱法[3，4]。其中顶空气相色谱法（HS/GC）具有分离效率高、检测灵敏度高、分析速度快、准确度较高、精密度高、杂质干扰少等诸多优点[5、6]，因而在BAC的测定中得到广泛应用。但是在实际应用中我们发现，实验过程往往受到同一个样品无法重复进样的问题，标样的储存和取用问题的困扰。因此，本文着重从上述三个问题入手，力争可以解决实际操作过程中遇到的这些问题。 　　1 实验部分 　　1.1 仪器与试剂 　　药品试剂：无水乙醇（Sigma-aldrich，色谱纯），叔丁醇（Fluka，色谱纯）。 　　仪器设备：顶空进样器（Agilent 7894E Headspace Sampler）；气相色谱仪（Agilent 6890N GC），GILSON活塞排代式移液器（M1000型），GILSON空气排代式移液器（P100型）。 　　1.2 实验步骤 　　（1）样品处理：将无水乙醇标准品配制成10mg/mL的标注样品贮备液，冷藏备用。 　　配制2.0mg/mL的叔丁醇溶液，作为内标物，冷藏备用。 　　精密量取血液样品500μL，加入10mL顶空瓶，再加入2.0mg/mL的叔丁醇内标液50μL，压盖封口，制成待检样品，供HS/GC分析。 　　（2）进样器条件：样品瓶温度70℃，进样环温度80℃，传输线温度90℃； 　　（3）色谱条件：色谱柱DB-ALC1 30m×530μm×3.0μm毛细管柱，柱温箱100℃（保持8min），载气N2，流速3.0mL/min； 　　（4）检测器条件：火焰光度检测器（FID），加热器温度280℃，氢气流量40.0mL/min，空气流量300mL/min。 　　（5）线性回归方程：将10mg/mL的乙醇标准贮备液分别稀释成20mg/100mL、40mg/100mL、80mg/100mL、120mg/100mL、200 mg/100mL、300mg/100mL、400mg/100mL等浓度梯度的标准溶液。每个浓度梯度平行5份，加入内标物溶液，制成样品进行HS/GC分析。分析所得数据，按照经叔丁醇校正过的乙醇峰面积建立校正表，将校正表保存到色谱方法中，即得内标曲线-顶空气相色谱法[7]。 　　2 实际应用中存在的问题 　　2.1 重复进样的问题 　　在实际应用中，时常会发生由于各种原因而造成检验血液量采集不足的情况。通过顶空气相色谱分析的原理[8]可知，顶空瓶内的样品每进样一次都会造成浓度的损失，所以不能像直接进样分析那样对同一个检材样品进行重复进样分析。而按照要求却需要平行取样和留样备检，如果检材的量不足会给检验工作带来很大的困难。 　　由此我们考虑到：由于每次的进样量很少，损失量不多，因此按照亨利定律计算，重复进样分析得到的结果偏差可能不是很大。如果推测成立，则我们虽然不能把通过重复进样获得的数据作为检验意见的依据，却至少可以在平行样品出现数据异常时，对其相对标准偏差（RSD）[9]进行分析，分辨误差是来自检材均匀性、检材处理还是仪器进样，在检材极少时进行这样的操作就很有实际意义。 　　2.2 标样存储的问题 　　进口的标准物质购买困难，且价格昂贵。为了保证检验的准确性我们又需要定期校准标准曲线，不断消耗标准溶液。所以，如果储存在3℃条件下的10mg/mL乙醇标准溶液储备液，能够长时间储存而不发生浓度的变化，就可以缓解标液消耗的难题，也为标准物质存储相关的研究提供一些借鉴。 　　2.3 标样取用的问题 　　不同温度下溶液的密度是不同的，那么3℃条件下冷藏备