实验八、酵母菌子囊孢子的观察讲解.pptVIP

实验八 、酵母菌子囊孢子的观察 目的要求 学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 基本原理 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖有性孢子。 在酵母菌中,能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。 酵母菌形成子囊孢子需要一定条件，所以对不同属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 子囊孢子形成过程 图1、S.cerevisiae（酿酒酵母）的生活史 ——引自周德庆《微生物学教程》 图2、Schizosaccaromyces octsporus（八孢裂殖酵母）的生活史 ——引自周德庆《微生物学教程》 图3、Saccharomycodes ludwiggi（路德类酵母）的生活史 ——引自周德庆《微生物学教程》 实验材料 菌种：酿酒酵母 培养基： 豆芽汁琼脂斜面 麦氏琼脂斜面 溶液或试剂： 5%的孔雀绿水溶液 0.5%的番红水溶液 95%的乙醇液。 仪器或其他用具： 载玻片 显微镜等。 实验方法 菌种活化 产孢培养 制片 染色 脱色 复染 镜检 菌种活化 产孢培养 常规制片 固定、染色、脱色 复 染 镜 检 实验结果 子囊孢子呈绿色 菌体呈粉红色 子囊呈粉红色 细胞（＋） 细胞（－） 管状突起 管状突起 接触、融合 质配 核配 减数分裂 4或8个子核 结合原生质 形成孢子壁 子囊孢子 两个邻近的细胞各伸出一根管状原生质突起，然后相互接触并融合而成一个通道，细胞质结合(质配)，两个核在此通道内结合(核配)，形成双倍体细胞，并随即进行减数分裂，形成4个或8个子核，每一子核和其周围的原生质形成孢子。含有孢子的细胞称为子囊，子囊内的孢子称为子囊孢子。 营养体即可以单倍体，也可以二倍体形式存在 特点： ①营养体一般以出芽繁殖 ②营养体可以单倍体又可以二倍体形式存在 ③特定条件下才可进行有性生殖。 营养体只以单倍体形式存在 特点： ①以无性的裂殖方式进行繁殖②二倍体不能独立生活，此阶段很短。 营养体只以二倍体形式存在 特点： ①营养体为二倍体，且不断进行芽殖②单倍体的子囊孢子在子囊内发生接合③单倍体阶段以子囊形式存在，不能独立生活。 酿酒酵母菌种 用接种环无菌 挑取少许菌种 25～28?C培养24hr 无菌操作接种在新鲜豆芽汁斜面 新鲜豆芽汁斜面 连续转接种3次 活化酵母菌种 用接种环无菌 挑取少许菌种 25～28?C培养1周 无菌接种在新鲜麦氏琼脂斜面上 麦氏琼脂斜面 生理盐水 1、滴生理盐水 滴半滴生理 盐水在载玻 片中央 挑取少量菌苔 与生理盐水混匀 均匀涂布 2、涂片 或电吹风吹干 3、干燥 室温自然晾干 5%孔雀绿染液 2、染色 滴孔雀绿染液在 菌膜上染色3min 95%酒精脱色30s, 立即水洗 95%酒精 3、脱色 1、固定 通过火焰上方3次 0.5%番红水溶液 1、滴番红水溶液 滴加数滴番红染液在菌膜上 复染30s 2、水洗 不要直接冲菌膜 或吸水纸吸干 1、干燥 室温自然晾干 或电吹风吹干 2、镜检 显微镜操作程序 油镜使用注意事项 * *