《食品微生物学实验指导书.docVIP

《 食品微生物学 》课程 课程编号：419005 实 验 指 导 书 主撰人 曾 智 审核人 陈跃进 单位：生命科学系 二O一二 年 六 月 目 录 前言 1 实验一、 显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察细菌的革兰氏染色显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察细菌的革兰氏染色 实验总体要求 通过本实验课程的教学，学生能基本上达到独立完成实验内容，通过老师的指导可完成研究性实验内容，能将微生物菌种分离与鉴定、无菌操作等相关知识应用到课程设计、创新性研究、毕业论文等实践性环节中。 本课程的重点、难点及教学方法建议 （1）重点：无菌操作、微生物分离与鉴定等。 （2）难点：严格按照微生物实验操作要求进行各项实验，并理解各注意事项的原因。 （3）教学方法建议：注意理论与实际相结合，重视动手能力的培养和锻炼，对实验结果的可靠性进行对照分析和检测分析。对理论性较强、较为抽象的问题、原理着重讲解，如革兰氏染色法的原理和应用。 实验一 显微镜油浸系物镜的使用与微生物形态观察 掌握显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。 微生物标本装片，香柏油，二甲苯，光学显微镜，擦镜纸。油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n 1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的油镜时，能辨别两点之间的距离则为0.22μm。 光学显微镜的成像原理（倒立的虚像） 介质为空气与介质为香柏油时光线通过的比较 一观察前的准备 1、将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约4cm。坐正用左眼观察。 2、调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。 二低倍镜观察染色装片 首先上升镜简，将枯草芽孢杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜正下方，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升 或使镜台下降 至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。 三高倍镜观察 眼睛离开目镜从侧面观察，旋转转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相懂。再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。不要移动装片位置，准备用油镜观察。 四油镜观察 1、提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位镜头的正下方滴一滴香柏油。 2、从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。 3、将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升切忌反方向旋转，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作直至物像看清为止。仔细观察并绘图。 4、再次观察 提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。重复观察时可比第一次少加香柏油。 五镜检完毕后的工作 1、移开物镜镜头。 2、取出装片。 3、清洁油镜，油镜使用完毕后，须用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜纸擦干残留的二甲苯。 4、擦净显微镜，将各部分还原。将接物镜呈“八”字形降下，不可使其正对聚光器，同时降下聚光器，转动反光镜使其镜面垂直于镜座。最后套上镜罩，对号放入镜箱中，置阴凉干燥处存放。使用油镜应特别注意哪些问题？为什么必须用香柏油？ 使用显微镜绘图时，眼睛的位置 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ 4、转到高倍镜和油镜时，对照明度有何要求？应如何调节？不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 拿显微镜时，一定