十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响.docVIP

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响 摘要 在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠（SDS），探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明，在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率，添加量为0.10%时精子活率最高，为73.90%；添加量为0.20%时顶体完整率最高，为58.46%；添加量为0.10%时精膜完整率最高，达54.13%。随着SDS添加浓度的增加，冻后精子质量也随之改善，但添加量至0.20%时，冻后精子质量显著下降（P 0.01）。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。 关键词 山羊；冷冻精液；十二烷基磺酸钠（SDS）；精子活率；顶体完整率；质膜完整率 中图分类号 S827.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）19-0286-01 Abstract In this experiment，the goat sperm was frozen in extrender containing 0.05%，0.10%，0.15%，0.20%，0.25%，0.30% SDS respectively. The best results about semen motility，aerosome intact and membrane integrity were obtained with SDS at 0.10%（73.90%），0.20%（58.46%） and 0.10%（54.13%） respectively.The quality of goat sperm after thawing decreased siginficantly with 0.20% SDS（P 0.01）. In the experiment，the suitable addition of SDS was 0.10%. Key words goat；frozen semen；SDS；semen motility；aerosome intact；membrane integrity 我国的养羊业具有悠久的历史，山羊品种资源非常丰富。养羊业的发展关系着国民经济的发展和全国人们生活水平的提高。在广大的牧区、山区和丘陵地区，养羊业都有着巨大的发展潜力[1]。我国在山羊品种良种化方面与发达国家相比仍然存在较大差距。要解决这些问题，关键在于迅速提高山羊品种的良种化程度，因而需要优秀种公羊。目前在实际生产中，用鲜精进行人工授精可以提高优秀种公羊的利用率，但是这种方法受到很多因素制约，不能充分发挥优秀种公羊的作用和潜能。精液冷冻保存技术是人工授精技术的一大革新。这种方法将精子存放于-196 ℃低温环境中，以暂时停止其新陈代谢，而升温后又能使精子恢复活力。此种方法由于限制较少，有利于提高优良种公羊的利用率，促进品种改良[2]。山羊精液冷冻保存技术始于1950年[3]，20世纪60年代，一些国家才开始应用山羊冻精进行人工授精。然而现如今在大多数应用中山羊精子的活率都无法稳定超过50%[4-6]。十二烷基磺酸钠（SDS）具有提高精液活力的作用[7]。本试验拟研究安徽白山羊精液冷冻保护液中添加SDS的效果。 1 材料与方法 1.1 试剂 主要试剂：十二烷基磺酸钠（上海试剂公司）、葡萄糖（天津石科密欧化学试剂开发公司）、hepes（Sigma）、二水柠檬酸钠（天津市福晨化学试剂厂）、青霉素（华北制药股份有限公司）、链霉素（华北制药股份有限公司）、甘油（天津市化学试剂三厂）等。 1.2 仪器 生物光学显微镜（XSJ-2型）；相差显微镜（Olympus）；热点鼓风干燥箱（HG101-2型）；电子分析天平（JA1003型）；自动双重纯水蒸馏器（SZ-93型）；精子品质自动分析仪（CASA，Windows XP）。 1.3 溶液的配置 冷冻稀释液基础液：葡萄糖3 g，柠檬酸钠1.6 g，hepes 1.6 g，甘油5 mL，卵黄20 mL，青霉素10万IU，链霉素10万IU，蒸馏水定容至100 mL。福尔马林磷酸盐固定液：称取Na2HPO4?12H2O 2.25 g和NaH2PO4?2H2O 0.55 g置于100 mL容量瓶中，加入0.89% NaCl溶液30 mL并溶解。加入甲醛MgCO3饱和液8 mL后，用0.89% NaCl溶液冲洗装过甲醛的量筒并倒入容量瓶中，定容至100 mL。姬姆萨原液：称取Giemsa染料1 g、甘油66 mL、甲醇66 mL，将Giemsa染料置于研钵中，加入一定量60 ℃的甘油，研磨至浆糊状。再将剩余甘油倒入，于56 ℃保温2 h。再用甲醇清洗容器并于棕色瓶中保存。精子低渗液：果糖0.675 6