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南极磷虾油中总砷含量及砷形态分析 　　摘要：南极磷虾油富含Omega3磷脂而具有强大的保健功能， 但由于其砷含量较高，在保健品领域的应用受到一定限制。由于南极磷虾油中含有大量的磷脂质，采用常规的提取方法分析难以对其砷形态进行准确定量分析。本研究采用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（（HPLCICPMS）联用技术建立了针对砷甜菜碱（AsB）、二甲基砷酸（DMA）、一甲基砷酸（MMA）、三价砷As、五价砷As5种砷形态的分析方法。采用C18固相萃取进行样品脱脂前处理，采用阴离子交换色谱IonPac AS9H阴离子分析柱（250 mm×4 mm），流动相采用38 mmol/L Na2SO4 +15 mmol/L乙酸钠；流速0.6 mL/min，流速1 mL/min，进行5种形态砷化合物的分析。结果表明，5种砷化合物的线性范围为0.5～500 μg/L，相关系数R0.9993. 检出限（LOD）为 0.1～0.2 μg/L，定量限（LOQ）为1.5～2.6 μg/L，RSD5%。加标回收率为88.9%～106.3%。样品的测定结果显示，南极磷虾油中砷形态的主要存在形式为无毒的砷甜菜碱，因此可以安全地应用于食品及保健品。 　　关键词 ：南极磷虾油； 砷； 形态分析； 高效液相色谱电感耦合等离子体质谱 　　1 引 言 　　南极磷虾已成为世界远洋捕捞业最重要的渔业资源[1，2]。南极磷虾中总脂肪含量丰富，约占鲜重的3%，从南极磷虾中提取的南极磷虾油含有丰富的Omega3（ω3）多不饱和脂肪酸磷脂质以及虾青素等生物活性脂质[3]。研究表明，南极磷虾油具有抗氧化、抗衰老、清除自由基、降血脂、健脑益智等多种功能，南极磷虾油已经在食品、保健品等多个领域得到应用[4～10]。 　　在南极磷虾作为重要的生物资源受到普遍重视的同时，其相关产品的食用安全性，特别是其中所含有毒重金属含量备受关注。自然界的砷元素存在于沉积岩和熔积岩中，主要经过地表径流等途径进入到海水中，又通过食物链在海产生物体内富集，特别是以水体中浮游生物为食物链的生物体内的富集倾向更明显，致使海洋生物中含有较多的砷[11]。海产品中砷的存在有很多种化学形态，包括无机砷和有机砷。其中无机砷包括三价的亚砷酸盐（As）和五价的砷酸盐（As）；检测到的有机砷形态包括一甲基砷酸（MMA）、二甲基砷酸（DMA）、砷胆碱（AsC）、砷甜菜碱（AsB）、砷糖及砷脂等[12]。砷元素的毒性与其存在形态密切相关，无机砷具有致癌毒性，有机砷通常被认为是低毒或无毒的。以砷化合物的半致死量LD50计，其毒性从大到小依次为AsAsMMADMAAsCAsB[13]。研究表明，海产品中虽然砷含量较高，但主要是以无毒的有机砷形态存在，在海洋动物（如虾、蟹）中最主要的砷形态是砷甜菜碱[13]。因此，在测定海产品中砷的含量时，进行砷的形态分析十分必要。对砷形态采用不同的毒性综合评价，比单纯用砷的总量评价海产品安全性更具科学性。 　　南极磷虾油中具有较高的总砷含量，使人们对其食用安全性产生一定疑虑，因此有必要建立准确、高效的南极磷虾油砷形态分析检测方法，进行南极磷虾油中砷元素的安全性评价。目前，针对食品中的砷形态分析研究已多有报道，由于多数砷化合物（如砷甜菜碱等）为水溶性化合物，因此样品大多可采用酸溶液或甲醇/水等极性溶剂进行直接提取，提取液经过滤后进行HPLCICPMS检测[12，14～17]。目前，针对南极磷虾以及鱼油等产品的砷元素分析已有相关研究报道[18，19]，但针对南极磷虾油样品的砷元素形态分析尚未见报道，使得南极磷虾油砷元素的安全性评价缺少必要的数据依据。南极磷虾油中砷形态分析的主要难点在于其主要成分与鱼油等油脂类样品存在较大差异。鱼油中主要成分为甘油酯等低极性脂，可以直接采用极性溶剂进行提取。南极磷虾油中除甘油脂外，还含有大量磷脂等极性脂，采用甲醇/水等极性溶剂的提取过程中会产生乳化现象，严重影响提取效率和检测精确度，因此样品前处理对分析检测结果准确性具有较大影响。本研究主要根据砷甜菜碱等5种形态砷化合物与南极磷虾油中脂质的极性差异，采用固相萃取方法对南极磷虾油样品进行脱脂处理，实现南极磷虾油中砷化合物的有效提取。采用HPLCICPMs法进行砷形态分析，实现了南极磷虾油中5种形态砷含量的准确检测，为南极磷虾油的食用安全性评价提供可靠了科学依据。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器、试剂与材料 　　CIC160型离子色谱仪（德国戴安公司），配有自动进样器； 8800型电感耦合等离子体质谱仪（美国Agilent公司）；IonPac AS19阳离子分析柱（250 mm×4 mm）；MilliQ超纯水处理系统（美国Millipore 公司）；MS 3basic（IKA）混旋仪数控超声清洗器；高速