氨酚曲马多分散片微生物限度检查方法学验证.docVIP

氨酚曲马多分散片微生物限度检查方法学验证 　　摘 要：本文按着《中国药典》2010年版的检测方法，对我公司生产的氨酚曲马多分散片进行微生物方法学验证，以确定检测方法是否可行。 　　关键词：氨酚曲马多分散片；微生物限度检查；方法学验证 　　《中国药典））2010版二部[1]规定，当建立产品的微生物限度检?朔ㄊ保?应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。依据《中国药典》2010年版二部附录XIJ“微生物限度检查法”，对氨酚曲马多分散片的微生物限度检查法进行了方法学验证，验证结果如下： 　　1 试验材料 　　1.1 仪器：二级生物安全柜、压力蒸汽灭菌器、电热鼓风干燥箱、生化培养箱等。 　　1.2 供试样品：氨酚曲马多分散片，本公司生产，规格：盐酸曲马多37.5mg，对乙酰氨基酚325mg，批号 　　1.3 标准菌种：金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003；大肠埃希菌CMCC（B）44102；枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501；白色念珠菌CMCC（F）98001；黑曲霉菌CMCC（F）98003。 　　1.4 试验用培养基：营养琼脂对照培养基，批号：135003-201103；玫瑰红钠琼脂对照培养基，批号：135005-201103；胆盐乳糖对照培养基，批号：135006-201104；营养肉汤对照培养基，批号：135004-201103；改良马丁对照培养基，批号：135002-201002；曙红亚甲蓝琼脂培养基，批号：051020；以上培养基均从中检院购进。 　　1.5 菌液制备 　　取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物接种于营养肉汤培养基中，30-35℃培养18-24小时，接种白色念珠菌的新鲜斜面培养物至改良马丁培养基中，于23-28℃培养24小时，分别取上述培养液用0.9%的无菌氯化钠溶液稀释至10-6、10-7、10-5，10-5备用。取黑曲霉菌的新鲜斜面培养物，加5ml0.9%无菌氯化钠水溶液，将孢子洗下，吸取菌液1ml至无菌比色管中，加适量0.9%的氯化钠溶液，与标准比浊管比浊，取比浊后的菌悬液用0.9%的氯化钠溶液稀释至10-4，备用。 　　1.6 供试液制备 　　称取本品10g，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，分散混匀使溶解，制成1：10供试液。 　　2 方法学验证试验[2] 　　2.1 细菌计数方法验证 　　2.1.1 试验组：取1：10供试液10ml，置无菌条件下离心（500转/分）5分钟，取上清液置无菌试管中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液补足10ml，再从中取1ml加适量稀释剂，依《中国药典》2010年版二部附录XIJ“微生物限度检查法”中薄膜过滤法过滤，冲洗量300ml并在最后一次冲洗液中加入1ml相应的阳性试验菌，取出滤膜，膜面朝上，贴于营养琼脂平板上，按规定培养，测定氨酚曲马多分散片的细菌数。 　　2.1.2 菌液组：取稀释好的各菌液1ml，加9ml稀释剂，低速离心――薄膜过滤（方法同试验组）测定所加的试验菌数。 　　2.1.3 供试品对照组：按试验组方法，测定供试品本底细菌数。 　　2.1.4 稀释剂对照组：取稀释剂替代供试液，按试验组的方法测定其菌数。 　　2.2 霉菌及酵母菌计数方法验证 　　2.2.1 试验组：取1：10供试液1ml加入阳性试验菌1ml，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，置规定条件培养，每种试验菌平行制备二个平皿，测定其霉菌及酵母菌数。 　　2.2.2 菌液组：取稀释好的各菌液1ml，方法同试验组，分别加入平皿中，加入玫瑰红钠琼脂培养基，置规定条件培养，测定所加的试验菌数。 　　2.2.3 供试品对照组：取规定量供试液，按菌落计数法测定供试品本底菌数。 　　2.2.4 稀释剂对照组：取稀释剂替代供试液，方法同试验组。 　　试验组菌回收率（%）= ■×100% 　　稀释剂对照组菌回收率（%）=■×100% 　　试验结果见表1。 　　2.3 控制菌检查方法的验证：常规法。 　　2.3.1 菌种 　　2.3.1.1 阳性菌：大肠埃希菌（44102） 　　2.3.1.2 阴性菌：金黄色葡萄球菌（26003） 　　2.3.2 试验方法 　　2.3.2.1 试验组：取1：10供试液10ml，加入100ml胆盐乳糖增菌液中，再加1ml阳性菌（即大肠埃希菌浓度同细菌数验证），摇匀，置35-37℃培养18-48小时依《中国药典》2010