菠菜中提取叶绿素.docVIP

实验 菠菜色素的提取和色素分离 （extraction of pigments from spinach and chromagraphic isolation） 【实验目的】 （1）通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法； （2）通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理； （3）从菠菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。 【实验原理】 色谱法利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组分分开。薄层色谱法是其中一种微量快速的分析分离方法。它具有灵敏、快速准确等优点。 薄层色谱属于固-液吸附层析的类型。通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层，作为固定相，以有机溶剂作为流动相。实验时，把要分离的混合物滴在薄层板的一端，用适当的溶剂展开。当溶剂流经吸附剂时，由于各物质被吸附的强弱不同，就以不同的速率随着溶剂移动。展开一定时间后，让溶剂停止流动，混合物中各组分就停留在薄层板上显示出一个个色斑的色谱图。若各组分无色，可喷洒一定的显色剂使之显色（如图）。 混合物中各物质在薄板上随溶剂移动的相对距离称为比移值（Rf值）。 如下图中： a）原板 （b）已展开层析板 图 ?薄层色谱装置图 图? 薄层色谱效果图 在一定条件下，各物质具有一定的Rf值。不同物质在相同条件下，具有不同的Rf值。因此，可利用Rf值对物质进行定性鉴定。但物质的Rf值常因吸附剂的种类和活性、薄层的厚度、展开剂及温度等的不同而异。所以在鉴定样品时，常用已知成分作对照试验，在同一个薄层板上进行层析，然后通过Rf值的比较，对物质作定性鉴定。根据斑点的面积大小和颜色的深浅的标准物的对照下还可进行定量。 化合物的吸附性与其极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时吸附性也较强。展开剂（溶剂）的极性越大，则对化合物的洗脱力越大，则Rf越大（如果样品在溶剂中有一定的溶解度）。 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。本实验从菠菜中提取上述几各色素，并通过薄层层析进行分离。 叶绿素存在两种结构相似的形式——叶绿素a（C55H72O5N4Mg）b（C55H70O6N4Mg）a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。 胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-,β-和γ-胡萝卜素，其中β-异构体含量最多，也最重要。在生物体内，β-体受酶催化氧化即形成维生素A。目前β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。 叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 β-胡萝卜素（R H） 叶黄素（R OH） 维生素A 【实验试剂】 20g菠菜叶，20mL甲醇，40mL石油醚（60~90℃）－甲醇（3:2）溶液，硅胶G，0.5%羧甲基纤维素钠，无水硫酸钠，石油醚－丙酮（8:2），石油醚－乙酸乙酯（6:4） 【实验步骤】 1、薄层板的制备 取四块显微载玻片，洗净晾干。 在小烧杯中，放置3.0g硅胶，逐渐加入0.5%羧甲基纤维素钠水溶液6~7mL，调成均匀的糊状，其稀稠为在震动下可流动，倒在洁净的载玻片上，用食指和拇指拿住玻璃板，前后左右振摇、摆动，并不时转动方向，制成薄厚均匀、表面光洁平整、无气泡的薄层板，厚度为0.25~1.0mm。 涂好后的硅胶G薄层板置于水平的玻璃板上，在室温下放置0.5h后（注意：室温放置必须使玻板干透，否则会出现断裂现象），放入烘箱中缓慢升温至110℃，恒温0.5~1h后取出，稍冷备用。 2菠菜色素的提取 称取20g洗净用滤纸吸干的的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与20mL甲醇拌匀，在研钵中研磨约5min然后用布氏漏斗抽滤菠菜汁，弃去滤液。 将菠菜汁放回研钵，每次用20mL 3:2（体积比）的石油醚-甲醇混合液萃取两次，每次需加以研磨充分并且抽滤。 注意：因石油醚易挥发，抽滤时先倒少许清液浸润滤纸，抽滤时真空度不要太大！ 合并滤液，用吸管取上层深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用10mL水洗涤两次，以除去萃取液中的甲醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化。 弃去水—甲醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥30min后，滤入圆底烧瓶（勿将干燥剂滤入），在水浴上蒸去大部分石油醚至体积约为1mL为止。石油醚回收。 3、点样 取活化