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白术组分拆分及组间差异度评价方法的建立 　　摘 要 通过多种分离方法联合应用，将白术化学成分拆分成5个部分，各拆分组分组内指纹图谱相似度评价表明，拆分工艺稳定、重现性良好。采用差异度表征中药化学拆分组分间的不交叉程度。利用主成分分析、聚类分析及夹角余弦、平方欧式距离和生药峰面积交叉分析法对白术化学拆分组分进行不交叉的定性与定量分析，表明白术化学拆分组分组间差异度不低于85%。其中生药峰面积差异度分析法是在中药指纹图谱基础上建立的表征中药拆分组分差异度的新方法。通过与不同分析方法比较，发现其较适合中药药效或药性物质研究中的拆分组分间不交叉程度的评价。 　　关键词 白术； 化学组分拆分； 组间差异度分析 　　1 引言 　　中药活性或有效组（成）分的研究，一般通过对水煎液或醇提液进行化学拆分，以评价最强活性组分。但对于各拆分组分之间的成分交叉性鲜有评价，最终为有效组分的确定增加了不确定因素。若中药各组分交叉太大，活性成分在各组分中分散，评价活性成分时会引起“丢失”。近年来，匡海学等提出“中药性味可拆分性、可组合性的研究方法”[1]。但目前尚没有不交叉性的定量分析方法。本研究以白术为例，通过定性和定量分析，建立其拆分组分间的不交叉性评价的新方法，为后续有效组分及性味组分的评价奠定基础。 　　白术为菊科植物白术（Atractylodes macrocephalaKoidz.）[2]，其主要化学成分有挥发油、白术内酯、聚炔、多糖等化合物[3，4]。白术具有多种药理作用[5～8]。目前多采用高效液相色谱法（HPLC）对中药化学组分进行表征，并采用主成分分析方法进行不交叉性的定性分析[9]。现虽已有文献报道了中药组分的拆分方法，但并没有交叉度分析的具体方法[10，11]。本研究将常见的化学分析法及软件应用于组分间交叉度分析中，对中药拆分组分进行了不交叉性的定性和定量分析。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　Agilent1260高效液相色谱系统（美国Agilent科技公司），配有DAD检测器，在线脱气机，自动进样器；HH S型水浴锅和旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限公司）；FD 1A 50冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）；DZF 6050真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；PCJ 10超纯水机（品成科技有限公司）。 　　D101大孔吸附树脂（沧州宝恩科技有限公司）；白术药材2012年11月采于浙江于潜，经辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为菊科植物白术（Atractylodes macrocephalaKoidz.） 的根茎；甲醇、乙腈（色谱纯，瑞典Oceanpak Alexative Chemical公司）；超纯水；其余试剂均为分析纯。 　　2.2 HPLC色谱条件 　　Kromasil C18柱（250 mm ×4. 6 mm，5 μm），二极管阵列检测器（DAD） ，以乙腈（A） 水（B）为流动相梯度洗脱：0～5 min， 3%A； 5～10 min， 3%～10% A； 10～25 min， 10%～40% A； 25～40 min， 40%～60% A； 40～50 min， 60%～100% A； 50～60 min， 100% A； 60～70 min，100%～3% A； 流速1.0 mL/min； 柱温25 ℃； 检测波长242 nm。 　　2.3 白术化学组分拆分方法 　　取白术药材100 g，粉碎，水蒸汽蒸馏得挥发油组分。蒸馏后的水煎液浓缩至100 mL，加95%乙醇调醇浓度至75%，0～5 ℃放置过夜，倾出上清液，收集沉淀，沉淀依次用95%乙醇、丙酮洗涤3次，冷冻干燥后，得多糖组分。醇沉后得到的上清液挥至无醇味，加水至100 mL，石油醚60～90 ℃萃取，萃取至石油醚层颜色较淡，得石油醚Ⅰ。石油醚萃取后药液挥至无石油醚味，加水至300 mL，加于已处理的D101大孔吸附树脂柱（400 mL湿树脂）。洗脱液依次为水、80%乙醇，洗脱量依次为10倍和4倍柱体积，收集相应的洗脱液。水洗脱部分减压浓缩后冷冻干燥，得树脂水洗组分。醇洗部分浓缩至25 mL，再经石油醚60～90 ℃萃取，萃取至石油醚无颜色，得石油醚Ⅱ。合并石油醚Ⅰ和石油醚Ⅱ，得石油醚组分。石油醚萃取后的树脂醇洗部分，挥至无醇味后冷冻干燥，得树脂醇洗组分。 　　重复10次工艺，将白术化学成分拆分至大分子多糖组分及4个小分子组分。采用HPLC法建立4个小分子组分的指纹图谱，并分别建立其公共指纹图谱。 　　采用硅胶柱、ODS开放柱和制备液相等色谱方法，从白术拆分各组分中得到的化合物，通过NMR技术结合文献报道确定了其化学结构，并对指纹图谱进行表征。 　　2.4 白术拆分组分差异度评价方法的建立 　　由于