紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量.docVIP

紫外可见分光光度法测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量 　　【摘 要】目的 建立测定注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量的方法。方法 采用紫外可见分光光度法，检测波长为500nm，无水芦丁为对照品。结果 芦丁在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998（n=6），平均回收率为100.0%，RSD=0.13%（n=6）。结论 所用方法灵敏、准确、重现性好、结果可靠，可用于注射用山楂总黄酮中总黄酮的含量测定。 　　【关键词】注射用山楂总黄酮；总黄酮；紫外可见分光光度法；含量测定 　　山楂总黄酮即山楂叶总黄酮，是从山楂叶中提取的黄酮类化合物的总称，目前从山楂总黄酮中分离出的单体有三十多种，有牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、金丝桃苷、槲皮素等。山楂叶中的黄酮类化合物的药理作用有很多方面，例如对心、脑血管疾病有确切明显的疗效，山楂总黄酮对心绞痛、冠心病、心律失常、脑供血不足、脑动脉硬化症、脑血栓、老年性痴呆及各种脑损伤后遗症可产生积极的预防和治疗作用。 　　1.仪器与试药 　　TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；AE240电子天平（瑞士梅特勒公司）；所用试剂均为色谱纯。 　　2.方法与结果 　　2.1线性关系考察 　　对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品约10.08mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml含无水芦丁0.2030mg）[1]。 　　标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置20分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部 附录VA），在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、测试溶液中对照品浓度为横坐标绘制标准曲线。 　　回归方程为：y=0.0135x+0.0089 r=0.9998（n=6），表明对照品浓度在8.12～48.72μg/ml范围内呈良好的线性关系，符合含量分析测试要求。 　　图1 芦丁对照品标准曲线 　　2.2显色后测试溶液稳定性试验 　　取显色后的对照品测试溶液及供试品测试溶液，在60分钟内于500 nm波长处进行连续扫描，评价显色后测试溶液的稳定性。 　　对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品约10.26mg，置50ml容量瓶中，加乙醇适量使溶解，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。（每1 ml含无水芦丁0.2052mg）。 　　供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1512g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 　　试验方法：精密量取上述对照品溶液及供试品溶液各2ml，分别置25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，使摇匀放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录VA），在500nm的波长处分别取显色后0、5、10、15、20、25、30、40、50、60分钟的测试溶液测定吸光度。 　　结论：对照品溶液及供试品溶液显色后的测试溶液在20分钟后达到较稳定状态，在显色后20～60分钟内稳定性良好，符合含量分析测试要求。因此，确定本含量测定方法显色时间为20分钟。 　　2.3重复性试验 　　供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1522g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 　　结论：该含量测定方法的重复性良好，符合含量分析测试要求。 　　2.4供试品溶液稳定性试验 　　供试品溶液的制备：取注射用山楂总黄酮0.1530g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25ml， 密塞，摇匀，超声处理5分钟，放置3小时以上，滤过，精密量取续滤液2ml，置25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 　　试验方法：取供试品溶液，室温、密闭放置，于12小时内测定，评价供试品溶液的稳定性。分别于0、3、6、9、12小时取供试品溶液2ml，置25ml容量瓶中，照总黄酮含量测定方法进行测定，计算RSD值。 　　结论：供试品溶液置室温、密闭条件下放置12小时，稳定性较好，符