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紫苏草试管开花的研究 　　摘 要：为了建立紫苏草离体试管开花体系，本试验以紫苏草种子无菌苗为外植体，通过对培养基中激素及营养水平的调整、采用低温处理和PEG的使用，从中找到离体开花的最适条件。结果表明：植物激素影响紫苏草试管花形成发育，采用MS附加6-BA 1.0 mg?L-1和IAA0.5 mg?L-1对于紫苏草试管苗开花的诱导效率最高； 采用10 ℃低温处理2 d对试管苗开花率有提高作用；培养基中营养水平不同对开花有影响，半量MS培养基利于试管开花；在培养基中加入10%PEG-6000可以提高开花率和开花质量。 　　关健词： 紫苏草；PEG-6000；试管开花；培养基 　　中图分类号：S636.9 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.11.002 　　试管开花是利用组织培养技术使得组培植物在离体环境下开花的一种现象。离体试管开花一般不受季节变化的影响，可以控制植物在一定条件下随时进入开花期。目前有关组培材料离体开花的报道已经很多，其中有一些是在进行植物组织培养中偶尔发现的，有些是有目的诱导的[1-8]。本试验以紫苏草试管苗为对象，寻找控制其离体开花的培养条件，主要目的是为研究其花期生理与调控奠定基础，也为研究植物成花机制提供一个良好的试验平台。同时也可以进行紫苏草试管花卉的开发，带动相关产业的发展[9-14]。 　　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　紫苏草Perilla nankinensis种子购自天津市曹庄花卉市场。 　　1.2 紫苏草无菌苗的制备 　　取紫苏草的种子，从中挑选饱满、无病虫害的种子在超净工作台中进行消毒处理。先用浓度为70%的乙醇将种子打湿30 s，倒掉酒精后，采用40%的安替富民浸泡消毒10 min，倒掉消毒液后用无菌水反复冲洗3～5次，每次洗10 min，然后将消毒好的种子播种在事先准备好的1/2 MS培养基上进行无菌苗的培养。具体培养条件为：培养温度为24 ℃，24 h光照，光照强度1 500～2 000 lx。 　　1.3 不同浓度的BA与IAA对紫苏草试管开花的影响试验 　　当紫苏草试管苗长到3～5 cm时，用剪刀在超净台中剪下根以上部位，然后将其接种到含有不同浓度的BA与IAA的MS培养基上，每种培养基中都含有30 g?L-1的蔗糖和6.8 g?L-1琼脂粉，pH值调到5.8. 具体培养条件为：培养温度为24 ℃，24 h光照，光照强度2 000 lx。在培养期间观察植株生长情况并随时进行试验记录，在培养70 d时对每个处理进行开花率的统计。 　　1.4 低温的处理 　　切取无菌苗接于以MS为基本培养基，加入相同的1.0 mg?L-1 6-BA和IAA0.5 mg?L-1激素，并添加7.0 g?L-1琼脂粉和30 g?L-1的蔗糖，在10 ℃和15 ℃低温下分别处理1，2，3 d后，再进行开花诱导，每天光照24 h，光照强度2 000 lx。在培养期间观察植株生长情况并随时进行试验记录，在培养70 d时对每个处理进行开花率的统计。 　　1.5 培养基中无机盐的含量对紫苏草试管开花的影响试验 　　将用于紫苏草试管开花的MS培养基中无机盐含量分别设成1，1/2，1/4和1/8，并在培养基中添加相同的1.0 mg?L-1 6-BA和IAA0.5 mg?L-1激素和30 g?L-1的蔗糖、6.8 g?L-1琼脂粉，pH值调到5.8，每个处理50株。培养温度为25 ℃，每天光照24 h，光照强度2 000 lx。70 d左右统计开花率。 　　1.6 PEG-6000的处理 　　采用1/2 MS为基本培养基，其中添加相同的1.0 mg?L-1 6-BA和IAA0.5 mg?L-1激素和30 g?L-1的蔗糖、6.8 g?L-1琼脂粉，pH值调到5.8，并在上述培养基中分别加入浓度为0%，5%， 10%， 15%的PEG-6000， 将紫苏草的无菌苗接种到上面进行离体开花的诱导。具体培养条件为：培养温度为24 ℃，24 h光照，光照强度2 000 lx。在培养期间观察植株生长情况并随时进行试验记录，在培养70 d时对每个处理进行开花率的统计。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同浓度的BA与IAA对紫苏草试管开花的影响 　　紫苏草试管苗在不添加任何激素的培养基处理中虽然能够正常生长但都没有开花现象，说明激素是紫苏草开花的必须条件。但在1.5 mg?L-1 6-BA+0.5 mg?L-1 IAA与0 mg?L-1 6-BA+1.0 mg?L-1 IAA的处理中也没有出现开花现象，这说明紫苏草必须在适合的分裂素与生长素下才能开花。从表1可以看出，在1.0 mg?L-1 6-BA +1.0 mg?L-1