植物の「みずみずしさ」の分子機構解明とその応用のた.ppt

* * * アクアポリンのEloopにあるNPAモチーフ近傍のスレオニンをメチオニンに置き換えるポイントミューテイションで水輸送活性を失わせることができます。これを利用して、共発現の時 * * * 東京農工大学生物生産科学フロンティアⅣ　2010/06/04 * PIP2;4 PIP1;2 Co-expression of HvPIP1;2 and HvPIP2;4 activated each others by two means: Translocation to the plasmamembrane Direct activation Inactive HvPIP2;1 T229M can activate PIP2;1 via heteromerization 抗HvPIP2;4抗体 抗HvPIP1s抗体 ┏ 検出用蛍光標識抗体 ┓ Fluorescence antibodies HvPIP2;4-injection Single expression HvPIP1;2-injection Co-expression PIP1はPIP2と共に膜へ移行して機能する PIP2;4 2 ng + PIP1;2T238M 10 ng PIP2;4T229M ---- Thr 229 is replaced by Met. PIP1;2T238M ---- Thr 238 is replaced by Met. Inactive HvPIP2;4 T229M can activate PIP1;2 via heteromerization Inactive HvPIP1;2 T238M can activate PIP2;4 via heteromerization 活性調節機構 （共発現／分子種間相互作用） イネプロトプラスト 相互作を蛍光で検出 （秋田県大） 表皮 皮層 内皮 道管 主にPIP2s （HvPIP2;2 主にPIP1s PIP1とPIP2が共発現 分子間相互作用による活性制御を組織ごとに使い分けている可能性 H2O Root hair 植物組織（オオムギ根:前出） Rice Nipponbare Lpr after 100 mM NaCl No reduction of Lpr Barley Lpr after 100 mM NaCl Time course Salt tolerance: high Salt tolerance: middle Salt tolerance: low 水輸送活性の調節　Internalization/Recycling Root hydraulic conductance Lpr is regulated by phosphorylation and possible trafficking of aquaporins in early phase of salt/osmotic stress Protein-phosphatase inhibitor Okadaic acid; OA and enodcytosis inhibitor wortmannin: wm inhibit salt-induce Lpr reduction at 1 h after stress mM mM μM mM mM μM μM Lpr of Haruna-nijo after salt 100 mM NaCl or osmotic 177 mM sorbitol stress Isotonic sorbitol induced identical Lpr change Root hydraulic conductance Lpr is regulated by phosphorylation and possible trafficking of aquaporins in early phase of salt/osmotic stress Lpr of Haruna-nijo after salt 100 mM NaCl or osmotic 177 mM sorbitol stress Exocytosis inhibitor brefeldin A : BFA inhibits temporal recovery of Lpr at 4 h after stress Root hydraulic conductance Lpr is regulated by phosphorylation and possible trafficking of aquapori