第3章酶工程-2007讲解.pptVIP

第四章 酶工程 第一节：酶工程概况 一.酶的概念及特性 1.什么是酶？ 2. 酶催化特性 高效率 比非催化高108－1020倍 比非酶催化高107－1013倍 高度专一性 反应条件温和 酶催化是可调控的 二.酶工程的发展概况 人们对酶的认识起源于生产与生活实践。 公元前12世纪周代人们酿酒，制作饴糖和酱，2000多年前，春秋战国时期已知用曲治疗消化不良的疾病。 西方国家19世纪对酿酒发酵过程进行了大量研究。直到1896年，Buchner兄弟用石英砂磨碎酵母细胞，制备了不含酵母细胞的抽提液，并证明此不含细胞的酵母提取液也能使糖发酵，说明发酵与细胞的活动无关。从而说明了发酵是酶作用的化学本质，酶学研究开始，为此Buchner获得了1911年诺贝尔化学奖。 1878年, 给酶一个统一的名词，叫Enzyme，这个字来自希腊文，其意思“在酵母中”。 后来对酶的作用机理及酶的本质做了深入研究，1930年，证实酶是一种蛋白质 80年代初发现了具有催化功能的RNA——核酶 ribozyme ，这一发现开辟了酶学研究的新领域， 现已鉴定出7000多种酶，数百种酶已得到结晶，而且每年都有新酶被发现。 酶工程即利用酶的催化作用，在一定的生物反应器中，将相应的原料转化成所需的产品。 酶工程是现代酶学理论与化工技术的交叉技术，它的应用主要集中于医药工、食品工业和轻工业等领域。 第一阶段：有目的地进行酶的生产和应用（1894年）。 第二阶段： 固定化酶阶段。 第三阶段： 第三代酶工程，酶作用机理等的研究。 第四阶段： 20世纪90年代，随着基因工程的广泛介入，一些原来只能由动物或植物生产的酶，经过酶基因重组，可以在微生物上表达。由于在发酵过程中很容易对微生物进行控制，因此 “基因工程＋发酵工艺＋先进的发酵设备”可以算是酶工业的第四次飞跃。 三 酶工程的应用前景 酶工程已成为当代生物工程的重要支柱。已普遍使用于医药保健、食品、发酵、制革、纺织、日用化学等部门，在化学分析、生物传感器及环保方面也得到广泛应用。 酶工程的应用范围 （1）对生物宝库中存在天然酶的开发和生产。 （2）自然酶的分离纯化及鉴定技术。 （3）酶的固定化技术（酶和细胞固定化）。 （4）非水相酶催化技术 （4）酶反应器的研制和应用。 （5）与其他生物技术领域的交叉和渗透。 固定化酶技术、酶的化学修饰、酶的定向进化技术、模拟酶技术等。其中固定化酶技术是酶工程的核心。实际上有了酶的固定化技术，酶在工业生产中的利用价值才真正得以体现。? 第二节 酶的生产 一、提取法 提取法 酶的发酵生产 二、酶的发酵生产 酶生产中微生物的种类 微生物酶的发酵生产 酶发酵工艺条件的控制 第三节：酶的分离纯化 主要内容： 酶提取 酶提取的步骤 酶提取过程注意事项 一、酶 提 取 绝大多数酶是蛋白质，因此酶的分离提纯方法，也就是常用来分离提纯蛋白质的方法。 生物细胞产生的酶按存在部位分为两大类， 胞外酶:一类由细胞内产生然后分泌到细胞外进行作用的酶，这类酶大多都是水解酶类。 胞内酶:另一类酶在细胞内合成后在细胞内起催化作用的，这类酶数量较多。 一般而言，胞外酶比胞内酶更易于分离纯化。 酶的提纯常包括两方面的工作， 1 浓缩：把酶制剂从很大体积浓缩到比较小的体积， 2 去杂蛋白：把酶制剂中大量的杂质蛋白和其他大分子物质分离出去。 一般用两个指标来衡量分离提纯方法的优劣。 一是总活力的回收； 表示提纯过程中酶的损失情况 ;总活力 活力单位数／ml酶液 ×总体积 ml 。 二是比活力提高的倍数 表示提纯方法的有效程度 。比活力 活力单位数／mg蛋白 氮 总活力单位数／总蛋白 氮 mg。 一个理想的分离提纯方法希望比活力和总活力的回收率越高越好。 二、酶分离和纯化的步骤 1 选材：选择酶含量丰富的新鲜生物材料。 酶的提取工作应在获得材料后立即开始，否则应在低温下保存，-20～-70℃为宜。或将生物组织做成丙酮粉保存。 2 破碎 动物组织细胞较易破碎，通过一般的研磨器、匀浆器、高速组织捣碎机就可达到目的。微生物及植物细胞壁较厚，需要用超声波、细菌磨、冻融、溶菌酶或用某些化学溶剂如甲苯、去氧胆酸钠、去垢剂等处理加以破碎，制成组织匀浆。 3 抽提 在低温下，以水或低盐缓冲液，从组织匀浆中抽提酶，得到酶的粗提液。 4 分离及纯化 酶是生物活性物质，操作条件要温和，一般在0～5℃间进行。 粗分离：用分离蛋白质的方法，如盐析、等电点沉淀、有机溶剂分级、选择性热变性等方法可从酶粗提液中初步分离酶。 纯化：再采用吸附层析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、疏水层析及高效液相色谱法等层析技术或各种制备电泳技术进一步纯化酶，以得到纯