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在植物病害分子流行学研究中,通常利用PCR扩增基因组的特异基因区段,然后进一步对扩增的基因区段进行序列分析。 6、DNA序列分析(DNA sequence) 常规的诊断手段因病原菌而不同,如形态学方法(真菌、线虫)、生化方法(细菌)及微形态学方法(病毒)等。然而对于形态与生化方法相似而无法区分的致病菌的亚种、变种、致病型等,传统方法已无法解决,而分子生物学技术则可解决这些问题。 二、病原物鉴定 不同种的病原菌,必定在DNA的某个或某些区段存在差异。在分析这段DNA片段序列的基础上,设计引物,经过PCR扩增,即可将特异编码的DNA片段用于鉴别目标病原菌。 其步骤为: ①寻找靶标病原菌特异的DNA片段,对其序列进行分析; ②根据DNA序列,设计对靶标病原菌特异的PCR引物; ③测定PCR引物的特异性和敏感性; ④开发经济、简便的DNA提取方法用于病原菌的分子鉴定。 最近发展起来real-time PCR的技术可以定量地测定PCR过程中DNA模板的浓度。其基本原理是用特殊的生物荧光物质标记特定的DNA探针,在PCR过程中可以通过对荧光强度的测定来定量DNA。 三、初始菌量的定量分析 Real time PCR 实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 Ct:Cycle threshold 每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。 现代技术植病流行学应用 一、“3S”技术 “3S”: 全球定位系统 Global Positioning System, GPS 遥感系统 Remote sensing, RS 地理信息系统 Geographical Information System, GIS “3S”技术植病流行学应用 GPS可用于病害调查和病害防治。 RS可以综合反映病害引起植物的病变程度,能够在早期并且在较大范围内对植物病害做出准确的监测。 GIS能够利用由GPS和RS获得的数据,将同一坐标系中由不同特性构成的图形相互叠加在一起,由此可以获得更多空间信息。 1、全球定位系统(GPS) GPS的组成: 空间部分 21颗工作卫星、3颗备用卫星。 控制部分 主要由地面控制站组成,可跟踪监测卫星的运行状况,计算其轨道,并将这些信息反馈给GPS卫星用于播发。 用户部分 包括GPS接受仪及外围设备,可以全天候的接收、处理和分析GPS信号,精确计算与GPS卫星之间的准确距离,从而实现快速定位。 GPS在植保中的应用,以美国尤为领先。目前美国的农场主在联合收割机、播种机和施肥机等农用机械上均安装了卫星定位仪(接受仪),以指导农业生产,实现了“精准农业”模式。 目前,我国各省植保部门的技术人员均配备了GPS仪,其主要用途是在病害考察或调查中实现定位,便于某种病害多年的定点调查,有利于研究病害历年流行动态以及更精确的病害管理。 RS的原理是接受目标物辐射或反射的不同电磁波,通过一系列处理和解释过程,快速而准确地提供被测目标的有关信息。 绿色农作物反射的光谱有一定的规律,当农作物受到病害等灾害时,叶片会出现颜色的改变、结构破坏或外形改观等病态,叶片的反射光谱有明显的改变。这就可以利用遥感技术进行病害监测、早期诊断及病害流行规律研究等。 2、遥感技术 GIS是处理地理数据的输入、输出、管理、查询、分析和辅助决策的计算机系统,通过对多因子的综合分析,可以迅速的获取满足应用需要的信息,并能以地图、图形或数据的形式表示处理结果。 利用GIS可对植物病害进行监测、预报和风险分析。 3、地理信息系统 四、数字植保技术 数字植保技术是指把植保原始数据转换成可理解的信息,这种信息包括病虫发生危害的高分辨率卫星摄像、数字地图、作物、气候、经济、社会和人口的信息。而且要建立高速网络与数字植保连接,并通过Internet实行更高层次的访问,实现植保病情数据的远程传输与采集、病虫远程诊断和防治指导。 地统计学亦称地质统计学,是以区域化变量理论为基础,以变异函数为主要工具,研究在空间分布上
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