第7章色谱分离技术讲解.pptVIP

* 2. 层析柱的选择 层析柱的体积和高径比与层析分离效果的关系相当密切。 层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径。 分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度。 3. 凝胶柱的装填 空柱中应留1/5的水或溶剂。 所用凝胶必须是经过充分溶涨的。开始进胶后应当打开柱端阀门并保持一定流速，太快的流速往往造成凝胶板结，对分离不利。 进胶过程必须连续、均匀，不要中断，并在不断搅拌下使胶均匀沉降。 4. 样品处理和加样 分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％一般约0.5-2ml 在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％。 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。 4. 样品处理和加样 加样时尽量减少样品的稀释及凝胶床面的搅动。 直接将样品加到层析床表面 5. 洗脱与收集 为了防止柱床体积的变化，造成流速降低及重复性下降，整个洗脱过程中始终保持一定的操作压。 流速不宜太快且要稳定。洗脱液的成分也不应改变，以防凝胶颗粒的胀缩引起柱床体积变化或流速改变。 6. 凝胶的保存 1 干法 2 湿法 3 半缩法 第四节亲和色谱 亲和色谱 affinity chromatography，AFC 利用固定相配基与生物大分子之间的特殊生物亲和力的不同实现分离的。 亲和色谱广泛用于酶、抗体、核酸、激素等生物大分子以及细胞、细胞器、病毒等物