酵母各种杂交资料.pptVIP

设计含目的基因（诱饵）和下游报告基因的质粒，将其转入酵母细胞中。 将文库蛋白的编码基因片段与GAL4转录激活域融合表达的cDNA文库质粒转化入同一酵母细胞中。 若文库蛋白与目的基因相互作用，可通过报告基因的表达将其筛选。 实验过程简单，耗时短：能直接识别并找出与特异顺式作用元件相结合的蛋白质及其编码序列，而不需通过制备纯化蛋白或抗体等繁琐的生化手段来建立这种相互作用关系； 酵母属于真核生物，且蛋白质处于自然构象，避免了体外研究的不足。 与内源性的表达激活因子发生相互作用； 假阳性：插入的靶元件有可能不需要转录激活因子就可以直接激活报道基因的表达； 假阴性：融合蛋白有毒性、不能稳定地表达，错误折叠不能准确定位于酵母细胞核内、DNA 结合位点被封闭； 酵母细胞内蛋白修饰缺乏； TF: 介导蛋白质相互作用的第三种因子， 可以是蛋白质,DNA,RNA或小分子配体。 两个蛋白之间通过第三者发生相互作用，用来检测蛋白质与RNA、蛋白、小分子配体间相互作用 酵母三杂交技术 1、研究RNA-蛋白质间相互作用 2、研究小分子受体与蛋白质受体间相互作用 在该系统中, 第三个杂交小分子为Dex(地塞米松)-FK506 偶联体, 利用已知的地赛米松受体和FK506 受体FKBP12 分别构建AD 和BD 融合蛋白, 三种分子相互作用后, 成功的激活了报道基因的表达;而当单体FK506