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金针菇菌种液体发酵板栗壳培养基的配方研究 北京五中分校 孔令枫 指导教师：韩竹 戴毅新 【摘要】培养基是提供食用菌生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的、按一定比例配制的多种营养物质的混合物。培养基的恰当与否是食用菌液体培养的关键条件之一本文以金针菇为研究对象，通过单因子、双因子以及正交试验，用林产品深加工的废弃物板栗壳为主要营养源研究适宜金针菇菌种液体发酵的最佳培养基配方。实验结果选出了最适碳源、氮源、无机盐的含量，以及适合的维生素含量，用这种培养基培养金针菇菌种长出的菌丝长度和整齐度明显好于对照组。这一实验成果应用于生产将实现农产品的充分利用，缓解板栗加工厂大量废弃壳的堆积，进而减少了对环境的压力，使资源利用呈现良性循环。 【关键词】板栗壳、金针菇、液体菌种发酵、培养基配方 【前言】 一 问题的提出 北京的特产密云板栗，畅销海内外，但真空包装的板栗在加工过程中脱掉 的外壳却成堆的做为废品仍入垃圾堆。一种环保和资源意识促使我们开动脑筋要将它们再利用。我们走访了北京农林科学院，请这里的技术人员帮助鉴定板栗壳的成分，得出其成分有以纤维素为主的碳源，还有少量的低聚肽、寡糖、无机盐等。经过资料查询我们得知这些成分正是食用菌生长所需要的，于是我们尝试将板栗壳与添加物按最佳的比例配制成培养基栽培金针菇。 北京农林科学院，给与我们实验技术支持 课题组全体与农林院专家在食用菌基地 二 目前国内、外研究和应用现状 食用菌的液体发酵是在抗生素发酵技术的基础上发展起来的，1947年美国 的汉姆非特(HumefklH)首先提出了液体培养法生产蘑菇菌丝体。1948一1954 年他们选出了适合液体培养的蘑菇菌株。1953年美国人布洛克博士(S.S.Block) 用废柑汁深层培养出了野生蘑菇;1958年沙克斯(szuees)J第一个在发酵罐内 培养出羊肚菌菌丝球〔幻。日本的杉森恒武等于1977年用1%的有机酸和0.5%的酵母膏组成液体培养基，取得大量香菇菌丝体。从此，食用菌的培植开始从农 业生产跨入了工业生产的领域。当前，日本、韩国和我国台湾对液体菌种研究处于领先水平，但没有对食用菌液体菌种应用到出菇生产进行报道。 20世纪90年代，由于发现食用菌多糖有抗癌活性，所以，一些具有生理活性物质的菌类如云芝、灰树花等已成功地在上海食用菌研究所及浙江等地进行深层发酵培养。但用板栗壳作为营养源进行食用菌液体发酵还未曾发现。 由于用液体发酵法生产食用菌的菌丝体要比栽培子实体简便快速，因此，许 多目前还不能进行人工栽培的野生食用菌，如羊肚菌、美味牛肝菌、松菇、块菌、 鸡油菌等都可以用液体发酵法生产菌丝体。一个发酵罐短期内可以生产几吨至几 十吨的食用菌的菌丝体，而且还可以从发酵液和菌丝体中提取菌体代谢产物。因 而，液体发酵是其发展的必然趋势。 三 研究方向 主要以金针菇为研究对象用板栗壳为主要原材料建立一套液体菌种的发酵并进行栽培应用，找出金针菇板栗壳液体培养的最佳配方、生理条件和环境条件，并应用于实际的生产，以解决液体菌种的瓶颈问题，真正实现板栗壳和液体菌种的应用价值。所以，本课题不仅具有学术价值，更具有实际的应用价值和意义。 四 创新突破 1. 实现了废物再利用，即将林产品深加工的废弃物板栗壳重新作为原材料用 于食用菌的生产，节约了资源，实现了环保。 2. 根据液体培养基的配制原则和方法，采用单因子试验，优选出适合金针菇液体培养的碳源是板栗壳和葡萄糖。 3. 通过单因子试验，优选出金针菇液体培养的氮源是板栗壳和蛋白胨。 4. 通过正交试验确定培养基的最佳组合为：板栗壳3%，葡萄糖2%，麦麸2%，蛋白胨0.3%，硫酸镁0.05%，磷酸二氢钾0.05%，维生素B0.05%，豆油0.03%。 【研究过程】 一、食用菌培养基的概述 培养基组成对菌体生长繁殖、产物的生物合成、产品的分离精制乃至产品的 质量和产量都有重要的影响。食用菌的营养活动是依靠向外界分泌大量的酶，将 周围环境中大分子蛋白质、糖类、脂肪等营养物质分解成小分子化合物，借助于 细胞膜的渗透作用，吸收这些小分子营养物质来实现的。不同的食用菌的生长情 况不同或合成不同的发酵产物时所需的培养基有所不同，但所有的发酵培养基都必须提供微生物生长繁殖和产物合成所需的碳源、氮源、无机元素、生长因子、水和氧气等。 1. 培养基的选择 不同的食用菌对培养基的需求是不同的，因此，不同食用菌培养过程对原 料的要求也是不一样的。应根据具体情况，从食用菌营养要求的特点和生产工艺的要求出发，选择合适的培养基，使之既能满足微生物生长的需要，又能获得高产的产品，同时也要符合增产节约、因地制宜的原则。 （1）根据菌种用途选择不同物理形状的培养