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“Edit”－“Copy”－“Sense Primer” 5 CGCCTCGAGAAAAGACAGGACTCCACCTCA 3 输出引物序列 了解并掌握PCR基因扩增的基本原理 熟悉PCR基因扩增技术的具体操作过程 实验目的 第三部分 PCR实验操作 一、概述 PCR：使用一对寡核苷酸引物，以目的序列为模板，利用DNA合成 酶和四种脱氧核糖核酸进行DNA的体外合成反应。 PCR技术具有灵敏度高，特异性高、操作方便和重复性好等特点，能够在几个小时内获得多达几百万拷贝的目的基因。 该技术在上个世纪80年代中期由美国K.Mullis发明建立，经过近二十年已发展成包括多种衍生技术，在很多领域中广泛使用，K.Mullis也因此获得1993年度的诺贝尔化学奖。 二、PCR基本原理 DNA在细胞中的复制是一个复杂的酶促脱氧核糖核酸聚合过程，是 DNA聚合酶、DNA连接酶、引发酶、RNA引物、四种脱氧核糖核酸、DNA超螺旋酶、离子环境等多成份参与的过程。 PCR是在试管内使用最基本的成份模拟了细胞内的DNA复制，所以在一个PCR中必需成分是 1. 模板DNA 2. DNA聚合酶 3. 四种脱氧核糖核酸 4. 正向和反向两条引物 5. 适当的缓冲体系。 模板序列：待扩增的DNA序列，一般为双链的DNA可包括线形