空心莲子草不同溶剂提取液的抑菌活性研究.docVIP

空心莲子草不同溶剂提取液的抑菌活性研究 摘要：以乙醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯作为溶剂对空心莲子草全草有效成分进行提取，采用抑菌圈法比较提取液对6种受试菌的抑菌作用，用稀释法测定对受试菌的最小抑菌浓度。结果表明，空心莲子草提取液有较强的抑菌活性，乙醇、石油醚提取液对黑曲霉的最小抑菌浓度为0.25%，乙醇提取液对口腔念珠菌的最小抑菌浓度为0.25%，乙醇提取液抑菌活性总体好于其他溶剂提取液，溶剂影响提取液的抑菌能力。不同温度处理后乙醇提取液的抑菌活性测试表明提取液具有较好的热稳定性。 关键词：空心莲子草；提取液；微生物；抑菌活性 中图分类号：R151.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）06-1317-03 空心莲子草[Alternanthera philoxeroides（Mart.）Griseb]又名螃蜞菊、空心苋、水花生、革命草，为挺水型水生植物，一般簇生或大面积形成垫状物漂于水面，为外来物种。20世纪30年代传入中国，能迅速在水体中滋生、繁衍，对环境要求低，现在分布范围广，资源极为丰富，可用作饲料、肥料，也用于污染水体的净化和治理[1，2]。空心莲子草含黄酮甙、三萜皂甙、有机酸、酚类、香豆素、6-甲氧基木犀草素、7-α-L-鼠李糖甙及藤菊黄素等成分[3，4]。中医认为其性寒、味苦，有清热、凉血、解毒的功能，可用于流行性乙型脑炎早期、流行性出血热初期及血尿、尿路感染、麻疹的治疗。试验旨在探讨空心莲子草不同提取液对6种微生物的抑菌作用，希望能找出新的抗菌资源，为天然药物的开发利用提供资料。 1 材料与方法 1.1 供试材料 空心莲子草采自杭州市西湖茅家埠湖面，洗净、自然晒干后粉碎，取200 g用150 mL乙醇恒温60 ℃浸泡30 min过滤，滤渣重复提取3次，合并滤液用旋转蒸发仪减压浓缩成2 g的浸膏。同样方法制得丙酮、乙酸乙酯、石油醚溶液浸膏。 1.2 供试菌种和培养基 大肠杆菌（Escherichia Coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉（Penicillium citrinum）由浙江工业大学生物与环境工程学院微生物教研室提供；变形链球菌（Streptococcus mutans）、口腔念珠菌（Oral candidosis）由浙江中医药大学附属第三医院化验室提供。蛋白胨营养琼脂培养基（用于细菌培养）配方为牛肉膏5 g、蛋白胨10 g、NaCl 5 g、 琼脂18 g、水1 L，pH 7.2～7.6；马铃薯琼脂培养基（用于真菌培养）配方为马铃薯20 g、葡萄糖2 g、琼脂2 g、水1 L。 1.3 试剂及仪器 主要试剂有乙醇、石油醚、丙酮、乙酸乙酯，为市售分析纯；主要仪器有XM-52型高压蒸气灭菌锅、Yamato RE540型旋转蒸发仪、LRH-250A型生物培养箱、DGG-9053A型恒温干燥箱、48Q SG4A 280型灭菌箱、SW-CJ-IF型无菌操作台、FA-2004型电子天平。 2 试验方法 2.1 菌悬液的制备 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形链球菌37 ℃培养24 h，用灭菌生理盐水洗下菌苔，配制成107 CFU/mL的菌悬液。黑曲霉、青霉、口腔念珠菌28 ℃培养48 h，用灭菌生理盐水洗下菌苔，配制成107 CFU/mL的菌悬液[5，6]。 2.2 抑菌活性的测定 采用滤纸片法测定抑菌作用。在培养基表面接种50 μL菌悬液并涂布均匀。取各浸膏配制成30 mg/mL提取物溶液（提取液），取已灭菌直径6 mm干燥滤纸片浸于提取物溶液，滤纸片自然干燥10 min后贴于平板表面，每皿内贴4片，以相应的溶剂为空白对照。各皿放入培养箱中培养，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、变形链球菌37 ℃培养24 h，黑曲霉、青霉、口腔念珠菌28 ℃培养48 h，3次重复。十字交叉法测定抑菌圈直径，取平均值[7-9]。 2.3 最小抑菌浓度（MIC）的测定 取各浸膏分别配制质量分数（浓度）为4.00%、2.00%、1.00%、0.50%、0.25%的提取物平板，吸取0.1 mL的菌悬液加入到平板，用无菌棉签涂布均匀，置于恒温箱中（细菌37 ℃培养24 h，真菌28 ℃培养48 h）培养后检测，以无菌斑产生的最小提取物浓度为最小抑菌浓度（MIC）[10，11]。 2.4 提取液抑菌活性的热稳定性测定 选用空心莲子草的乙醇提取物，用无菌水配成10 mg/mL溶液，无菌封装后分别置于20、40、60、80、100 ℃水浴和120 ℃湿热条件下处理15 min，按2.2方法测定其抑菌活性[11]。 3 结果与分析 3.1 空心莲子草提取液对供试菌的抑菌作用 由空心莲子草提取液对各供试菌的抑菌试验结果（表1）可知，几种有机溶剂提取液都有