TSH荧光酶免疫分析法1课件.pptVIP

TSH荧光酶免疫检测法 相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入 一、先天性甲低的新生儿筛查方法 1、酶免疫分析法 enzymelmmunoassay，EIA 2、放射免疫分析法 radioimmunoassay，RIA 3、免疫放射法 immunoradiometricassay，IRMA  一、先天性甲低的新生儿筛查方法 4、时间分辨荧光免疫分析法 TRFIA me-resolvedfluorescenceimmunoas—say 5、荧光酶免疫分析法FEIA fluoreseenceenzymeimmunoassay 6、自动新生儿疾病筛查系统 automatednewbornscreeningsystem TSH荧光酶免疫分析法 1、原 理 1．原理 荧光酶免疫分析法 FEIA 是一种高度灵敏的检测方法，用FEIA测定血hTSH基于一步夹心法原理，采用固相、双位点荧光酶免疫分析法。 干血斑中洗涤出的hTSH，同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶 HRP 标记的抗hTSH—亚基的第二抗体结合。  2HPPA+H2O2 DPDPA+2H2O 原理 以甘氨酸缓冲液终止酶反应。 原理 用荧光读数仪以320nm为激发光，405nm为发射光测定荧光值。由于荧光强度与酶标反应板上结合的hTSH数量成正比，因此，通过已知浓度的标准血斑荧光值和样本的荧光值，也就可换算出样本血斑中hTSH的含量。 特点： ①荧光物质为DPDPA，是由HPPA与双氧水在HRP的作用下脱氢结合而成，它吸收特定波长（320nm）的光能后，发生原子重排，同时发射出更长波长（405nm）的光。 特点： ②鉴于HPPA（3-P-羟基苯丙酸）敏感性高、动力学范围广，已被广泛用于替代传统EIA显色剂，作为辣根过氧化物酶的底物。以HPPA作底物的FEIA可检测极低和极高浓度，具有明显优势，由于hTSH样本正常值与非正常值之间差异大，故该法特别适用于hTSH检测。 特点： ③HPPA／H2O2反应生成的荧光强度的影响因素中，最重要的是底物浓度、反应液和终止液的pH值。酶反应最佳pH值为7.8。加入碱性缓冲液终止酶反应，又可显著增强荧光强度。经测定，使用pH10.3、1.5 mol／L甘氨酸缓冲液可获得最大荧光强度。在低浓度hTSH下，该缓冲液可使荧光强度增加5倍，当hTSH浓度高于80mIU／L时，增强作用依次减弱。 特点： ④荧光产物稳定，可放置过夜后测定。无论在室温 20～25℃ 或30℃孵育用FEIA测定hTSH的敏感性无变化；而在37℃条件下孵育会增加背景荧光，降低灵敏度。建议底物孵育温度为20～30℃。 特点 ⑤FEIA检测法方法先进，重复性高。 一般情况下，批内分析变异系数和批间分析变异系数均小于10％。 特点 ⑥应用FEIA法进行hTSH检测时，其他垂体激素和人绒毛膜促性腺激素 HCG 对实验的干扰极小。 2、仪器和试剂 以下仪器均由芬兰Labsystems公司提供 1 、仪器： ①、荧光读数仪；②、孵育／振荡仪；③、自动洗板仪；④、3mm打孔器，或打孔钳；⑤、加样器；八道加样器。以上仪器均由芬兰Labsystems公司提供。⑥、3mm实验血片塑料支架；⑦、电脑、打印机；⑧、冰箱。 材料 ①、新生儿筛查滤纸干血斑标本：用SS903滤纸，按新生儿疾病筛查滤纸干血斑标本采集方法采集； 试剂 试剂 ①、抗hTSH包被的酶标板（1）：抗hTSH抗体IgG 小鼠单克隆抗体 包被的酶标板，浓度 1.0μg/m1。所有包被酶标板均置于有干燥剂的锡箔密封袋中以防止潮湿。潮湿将破坏酶标板的包被，严重缩短试剂盒保存期。试剂盒通常储存在2—8℃，为防止打开锡箔密封袋时水蒸气凝结破坏酶标板性能，试剂盒使用前需置室温半小时后再打开。若锡箔密封袋在使用前受损或干燥剂变色，请勿使用； ②、抗hTSH—HRP酶结合物（2） ：辣根过氧化物酶标记的抗hTSH 小鼠单克隆抗体浓度 50ngIgG／m1 抗体，加0．2％的KathonCGe作为防腐剂； 试剂 ③、酶结合物稀释液（3） ：缓冲盐溶液，pH6.5，加0.2％的KathonCG~作为防腐剂。用于酶结合物的稀释； ④、H