细胞工程-动物细胞融合与单克隆抗体解析.ppt

动物细胞融合与单克隆抗体 　　　第一节 动物细胞融合一、动物单个细胞的获得 动物细胞虽然没有细胞壁，但细胞间的连接方式多样而复杂，在进行有效的细胞融合之前，也必需获得单个分散的细胞。 组织的获得 采用各种适宜的方法处死动物，取出组织块放入小烧杯中，用剪刀将组织块剪碎成1mm3大小，用吸管吸取Hanks溶液冲下剪刀上的碎块，补加3－5ml的Hanks溶液，用吸管轻轻吸打，低速离心，弃去上清液，留下组织块。 组织的消化 通过生物化学的方法将剪碎的组织块分散成细胞团或单细胞。根据不同的组织对象采用不同的酶消化液。如最常用的有胰蛋白酶和胶原酶等。其他的酶如链霉蛋白酶、粘蛋白酶、蜗牛酶等也可用于动物细胞的消化。EDTA最适合消化传代细胞，常与胰蛋白酶使用。 胶原酶消化 是一种由细菌中提取的酶，对胶原和细胞间质有较强的消化作用，适用于消化纤维组织、上皮组织、癌组织等。 （1）向培养瓶中放入1－5mm3大小的组织块，加5ml 2000单位/ml的胶原酶干液，最终浓度为200单位/ml，pH=6.5。 （2）36.5℃水浴4－48小时，无需摇动，中间可更换酶液一次。 （3）当组织变软，分散于瓶底时，轻轻震荡即散成细胞团或单个细胞，小心倒出培养液。 （4）800r/min离心5分钟，弃上清液，重新悬浮BSS溶液中，再离心一次。 （5）加入培养液制成细胞悬浮液 二、细胞融合的方法