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细胞培养技术的革新—petaka细胞培养技术 细胞培养是指在模拟体内的生理环境下，给予适当的条件使活体组织细胞在体外环境下存活、生长增殖，并维持其结构功能[1]。由于在体内外的培养中，细胞行为的基本规律是一样的，因此许多研究可以再体外进行，更重要的是，在体外培养的条件下，人们可以有目的的、有选择的控制细胞生长的环境，借此可以研究在某些特殊条件下细胞生物学行为。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多领域显示出巨大的发展潜力[2]。 细胞培养是一项非常精细的工作，在培养过程中我们要注意一下几点： 1 所有与细胞接触的设备、器材和溶液等，都必须保持绝对无菌，避免细胞外微生物的污染。无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件，在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物质的防御能力，一旦被微生物和有毒物质污染，可导致细胞中毒死亡，因此，在体外培养细胞时必须保持细胞生存环境无菌无毒，并且及时清除细胞代谢产物。 2 必须有充足的营养供应，而绝对不可有有害物质，包括极微量的有害物质的渗入，为此必须注意器材的清洗和配液用水的质量。 3 有良好的适应其生存的外界环境，包括：温度、PH、渗透压、营养物、光、氧气等。维持培养细胞旺盛生长必须有恒定适宜的温度，而且气体是哺乳动物培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳；各种营养物质所组成的培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供细胞生长和繁殖的生存环境，他是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一；在大多数的合成培养基中还含有血清，它含有细胞生长所需的多种生长因子及其他的营养成分。 传统的细胞培养方法大多都是将分离纯化的细胞放置于细胞培养瓶中37℃ 5%CO2培养箱中培养，在这些条件下，由于并没有得到严格的控制，使得模拟的生长环境与严格的体内环境具有一定的偏差，进而导致在实验数据上存在一定的差异；而且在使用培养瓶上，对于细胞传代，由于实验操作的开放性，极其容易导致细胞发生污染！大多数的细胞在保存和使用环节上会存有冻存和复苏的方法，这就会造成大量细胞的活性降低，从而得不到理想结果。但是近年来，国际上出现的petaka细胞培养系统不仅完全克服了这些缺点，同时还延伸出其独特的功能，如可以在无CO2培养箱的情况下进行细胞培养，避免了在培养箱这一环节所造成的不利影响；可以直接在常温下运输，无需液氮或者干冰，直接细胞冻存/细胞分选/细胞显微镜下观察；无需胰酶，无细胞损伤即可收获细胞等。 Petaka细胞培养系统具体的优越性能，经过各方面的有效分析，归纳总结起来，一共有以下几个方面： 1 petaka培养系统基本性能优越 培养系统 75cm2细胞培养瓶 Petaka培养系统 加样口 广口，螺帽 密闭，针头/枪头注射 排气系统 无特定排气口 专利排气装置 尺寸 139×86×22（mm） 128×86×5.2（mm） 有效面积 75cm2 75cm2 最大细胞数 1.5×107 2.5×107 培养基体积 30ml 20ml 培养方式 水平培养 可直立/水平培养 密闭性 差 优 是否可离心 否 是 贴壁方式 单边贴壁培养 双边贴壁培养 图1：传统培养方式与petaka培养系统的比较 从图1这些基本参数上我们可以得出以下几点： 加样口和排气系统的设置，在无菌环境的条件下，进一步保证了培养环境的密闭性，减少了空气中的杂质对于细胞的污染，延长了细胞的保存时间，这种设计，也为利用petaka直接离心收集细胞提供了可能性。 结合两者尺寸的比较，我们可以得出在使用培养基的体积上，petaka细胞培养系统更加有优势，它可以节省培养基的使用量，提高细胞培养的效率。 在贴壁方式上，petaka细胞培养系统可以双边贴壁，增加了贴壁细胞数，且对于传统的单边贴壁培养来说，只可水平培养，petaka细胞培养系统则有效的利用了其双边优势，提升了培养的有效面积。 2 petaka细胞培养系统具备高仿真的体外培养环境 与传统的细胞培养系统相比，petaka细胞培养系统不需要co2培养箱，通过在适宜的条件下，比较两者在不同培养条件下的细胞数量可以得出下图： 图2：petaka细胞培养系统（0%co2,单边）与培养瓶75（5%co2）培养细胞培养动力学对比 从图2我们可以看出 在培养初期，与传统的细胞培养方法相比，petaka细胞培养方式细胞生长速率低，对于大多数细胞来说，在培养前两天细胞数量比较平稳，综合分析传统细胞培养生长速率快的原因是培养瓶的密封性不足，高氧，高湿度等在一定条件下加快了细胞的生长速率。 在增长期，两者相差不是太大，但是对于无co2的传统的培养方式细胞此时活性开始降低，主要是在这种情况下，细胞生存环境的PH值发生变化，影