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基因工程部分复习 一、基因及基因工程概述 二、基因工程理论基础 三、基因工程工具酶 四、基因工程载体 五、目的基因的获得 六、目的基因与载体DNA的连接 七、目的基因导入受体细胞 八、重组体筛选与鉴定 九、目的基因的高效表达 十、基因工程的应用及发展前景 举例：干扰素（IFN）是人体细胞分泌的一种活性蛋白质，具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性。早期的干扰素是用病毒诱导人体白血球或白细胞产生的，其产量低、价格昂贵。现在可以利用基因工程生产干扰素。 细胞工程（一） 一、细胞工程概述 （一）细胞工程的定义 （二）细胞工程分类和研究对象 （三）细胞的主要培养技术 （一）细胞工程的定义 细胞工程是在细胞水平上的工程，它应用细胞生物学和分子生物学的方法，以细胞和细胞器为对象进行操作，在体外条件下进行培养、繁殖，或人为的使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，最终获得人们所需要的组织、细胞或个体。（P51） （二）细胞工程分类和研究对象 A、根据研究对象划分 动物细胞工程 植物细胞工程 微生物细胞工程 B、根据研究水平来划分 组织水平 细胞水平 细胞器水平 基因水平 C、根据实验操作对象可分为： 细胞与组织培养 细胞融合 细胞核移植 染色体操作 转基因生物等 （三）细胞的主要培养技术 1、无菌操作技术 2、细胞培养技术：指生物细胞和组织在体外无菌条件下和适当的温度、气体和营养环境中的保存、生长和增殖。是细胞工程的最基本技术。 3、细胞融合技术：是指在离体条件下，用人工方法将不同种生物或同种生物不同类型的单细胞通过无性方式融合为一个杂合细胞的技术。包括病毒融合、化学融合、和电融合 4、细胞核移植技术：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 二、动物细胞工程 （一）、动物细胞研究历史进展和应用 （二）、哺乳动物细胞培养 （三）、动物细胞融合和单细胞克隆等技术 简介 （一）动物细胞研究历史进展和应用 1、动物细胞工程发展历史 1）、细胞融合现象的发现 19世纪30年代到50年代，Muller 等相继在肺结核、天花等病理组织中和正常组织中（如骨髓和肺等）观察到多核细胞现象；到1959年，自然界中广泛存在着多核细胞的事实，才被接受。 2）、动物细胞培养技术的建立 1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，并观察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他的工作被认为是动物细胞培养开始的标志； 1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于培养细胞的生长促进作用，并首次把无菌技术引入组织培养技术中。 1914年，Thomson建立了器官培养技术。 1940年，1951年，Earle和Gay分别建立了c3H小鼠结缔组织细胞系的L系和人体细胞系－人体宫颈癌Hela细胞系。 3）、细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生 1958年, Okada发现紫外灭活仙台病毒可引起艾氏腹水瘤细胞彼此融合。 60年代，Harris 1965 诱导不同动物体细胞融合获得成功并培养存活。 1975年，免疫学家Kohler和Milstein利用仙台病毒诱导绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，选择到能分泌单一抗体的杂种细胞。该杂种细胞具有在小鼠体内和体外培养条件下大量繁殖的能力，并能长期地分泌单克隆抗体，从而建立了小鼠淋巴细胞杂交瘤技术。 4）、动物克隆技术的建立 1962年，英国学者Grudon把非洲爪蟾小肠上皮细胞的核注入同种或异种非洲爪蟾未受精卵 经紫外线照射杀死卵细胞核 中，约有1％的重组卵发育成为成熟蛙。 这一成功开创了由体细胞培育动物个体的新型实验途径，其贡献在于： 证明了动物细胞仍然具有全能性； 初步建立了体细胞核移植的实验体系， 卵细胞质对体细胞核的发育功能起着关键性的调节作用 2、动物细胞工程的应用 动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体） 新品种培育 试管动物与婴儿 组织工程 珍稀动植物资源的保存与保护 （二）、哺乳动物细胞培养 1、培养对象细胞和性质 培养对象：哺乳动物细胞和昆虫动物细胞 哺乳动物细胞种类与性质 根据细胞的寿命，分为 非致死细胞：在体外培养基中不断增殖，数目以指数式形式增加，当细胞密度达到一定程度时，细胞停止分裂，不再生长。但当被放到新鲜培养基中，细胞重新生长。这样可以连续传代。这种细胞包括癌细胞、表皮细胞和成纤维细胞。 致死细胞：能在体外生存和增殖，但不能连续传代，往往分裂几代或几十代后就会死亡。大多数细胞属于这类细胞。 2、培养过程 1）动物细胞分离和传代培养过程 A 获得原代细胞 原代培养：从特定功能组织器官中分离后，无法增殖或处于稳定传代培养前动物细胞，又叫初代细胞。 获得原代细胞是一系列细胞培养的第一步 获得原代细胞的步