化学生物学化学物质和核酸的相互作用.ppt

一、基因突变的类型 （1）碱基置换（substitution） 它只涉及一对碱基被另一对碱基所置换。 分类：转换（transition），即DNA链中的一个嘌呤被另一个嘌呤或是一个嘧啶被另一个嘧啶所置换； 颠换（transversion），即一个嘌呤被一个嘧啶,或是一个嘧啶被一个嘌呤所置换。 ★直接引起置换的诱变剂 定义：一类可直接与核酸的碱基发生化学反应的诱变剂，不论在机体内或是在离体条件下均有作用。 种类：很多。例如亚硝酸、羟胺和各种烷化剂（硫酸二乙酯，甲基磺酸乙酯，N-甲基-N’硝基-N-亚硝基胍，N-甲基-N-亚硝基脲，乙烯亚胺，环氧乙酸，氮芥等）。 作用：它们可与一个或几个核苷酸发生化学反应，从而引起DNA复制时碱基配对的转换，并进一步使微生物发生变异。 羟胺只引起G┇C→A : T， 其余都是可使G┇C A : T发生互变的。 能引起颠换的诱变剂很少，只是部分烷化剂才有（参见下表）。 若干诱变剂的作用机制及诱变功能 亚硝酸引起的AT-GC转换细节 5-BU引起的转换 从上图中，还可以看到5-BU的掺入引起的G┇C回复到A?T的过程。通过这两个图示，就很容易理解为什么同一种诱变剂既可造成正向突变，又可使它产生回复突变的原因了。 也可以知道，为什么像5-BU这类代谢类似物只有对正在进行新陈代谢和繁殖着的微生物才起作用，而对休止细胞、游离的噬菌体粒子或离体的DNA分子却不起作用。 （2）移码突变 frame-shift mutation 或 phase-shift mutation，指诱变剂使DNA分子中增加（插入）或缺失一个或少数几个核苷酸，从而使该部位后面的全部遗传密码发生转录和转译错误的一类突变。 由移码突变所产生的突变株，称为移码突变株（frame-shift mutant）。与染色体畸变相比，移码突变也只能算是DNA分子的微小损伤。 丫啶类染料，包括原黄素、丫啶黄、丫啶橙和α-氨基丫啶等，以及一系列称为ICR类的化合物，都是移码突变的有效诱变剂。 图 能诱发移码突变的几种代表性化合物 吖啶类化合物的诱变机制： 至今还不很清楚。 有人认为，由于它们是一种平面型三环分子，结构与一个嘌呤–嘧啶对十分相似，故能嵌入两个相邻DNA碱基对之间，造成双螺旋的部分解开（两个碱基对原来相距0.34nm，当嵌入一个丫啶分子时，就变成0.68nm），从而在DNA复制过程中，会使链上增添或缺失一个碱基，结果就引起了移码突变。 基因突变的特点 ①普遍性 ②随机性 ③稀有性 ④有害性 ⑤不定向性 二、实例——镰刀型细胞贫血症 正常人的 红细胞 基因突变的实例——镰刀型细胞贫血症 基因突变的实例： ⑴物理因素：主要是各种射线。如：紫外线、Ｘ射线、α射线、γ射线等。 第三节 小分子化合物与RNA的相互作用 第四节 核酸的小分子探针 一、分光光度法 1．测糖法 （1）二苯胺法 在强酸性条件下，水解后的DNA能与二苯胺反应，并有蓝色产物生成，其最大吸收波长位于600mn处，由此可以测得样品中核酸的含量，测定DNA的范围为25~250μg/ml。 优点：与UV法相比，该方法更准确，灵敏度更高， 并且可以测定混合物。 缺点：方法冗长（需16~20h），条件苛刻， 在测定过程中容易造成样品的损失。 在硫酸中水解DNA，加入高碘酸和硫代巴比妥酸，则有粉红色反应物生成，λmax位于532nm处，可用于DNA的测定。 （2）硫代巴比妥酸 优点：RNA和蛋白质不干扰测定 RNA经热酸水解和转化之后，与地衣酚（5-甲基-1,3-苯二酚）在浓HCL及Cu2＋或FeCl3存在下反应，溶液呈绿色，λmax位于670nm处。在一定范围内，吸收强度与RNA的浓度成正比，用于测定RNA及其衍生物，灵敏度为0.015μmol/L。 （3）地衣酚法 （4）定磷法 将核酸和核苷酸用强酸消化，使有机磷变成磷酸根，再用一般测定磷的试剂显色。根据磷的含量即可推算出核酸和核苷酸的含量 优点：反应灵敏 缺点：DNA和RNA都含有磷，测定时必须分别测定 2．染料结合法 基于多核苷酸中两个单核苷酸残基之间的电离具有较低的pK′值（pK′ 1.5），当溶液的pH高于4时，全部解离，呈多阴离子状态，具有与某些阳离子染料结合的能力。 优点：简便、快速、灵敏、准确 缺点：蛋白质对体系的测定干扰严重 （1）甲基绿 在pH 7.9的Tris-HCl缓冲溶液中，将甲基绿与核酸的混合液加热至45℃，3h之后，在最大吸收峰630nm处溶液的吸光度，吸光度的强度与一定浓度的核酸成正比，将该方法用以测定DNA，其测定范围为0~300μg，检出限为2μg。 2．染料结合法 （2）甲苯胺蓝 甲苯胺蓝的水溶液在628nm处有一最大吸收峰，当有痕量DNA存在时，会导致最大吸