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广枣黄酮的提取及抗疲劳作用研究 　　【摘 要】目的：对广枣黄酮抗小鼠运动性疲劳作用效果进行研究。方法：将广枣黄酮分两个剂量组即1.0，2.0g?kg-1给实验组小鼠灌胃，对照组为生理盐水。30天后小鼠游泳造成运动性疲劳，测定小鼠力竭游泳时间、血清尿素氮（BUN）、肝组织丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）指标。结果：与运动对照组相比，小鼠负重力竭游泳时间显著延长，BUN、MDA指标明显下降，SOD活性显著升高。结论：广枣黄酮能显著提高小鼠的抗疲劳能力。 　　【关键词】广枣总黄酮；小鼠；运动性疲劳 　　0 引言 　　广枣为漆树科植物南酸枣的干燥成熟果实，又名五眼果.广枣中含有糖、氨基酸、鞣质、甾醇、黄酮类及酚性成分，广枣中的总黄酮（TFC）被多数学者认为是其有效成分，具有多种生理活性。体外实验证明，类黄酮具有自由基抑制活性，且不同种类的类黄酮对自由基清除作用不同。 　　笔者旨在进一步研究广枣黄酮体内抗运动性疲劳作用及其对疲劳小鼠自由基代谢的影响，为纯天然抗疲劳药物的开发提供理论及技术保证。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　广枣药材，市售，产于四川，经赣南医学院药学院中药鉴定教研室鉴定。芦丁标准品，购于中国药品生物制品检定所；无水乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝均为分析纯试剂。选用清洁级小鼠30只，均为雄鼠，由江西省医学实验动物中心提供。 　　1.2 样品的处理方法 　　广枣药材粗粉10g，以50%乙醇为溶剂，加热回流提取2次，液料比8：1，每次30min，合并两次提取液，滤过，滤液回收乙醇，冷冻干燥，称重，测定其中总黄酮的含量。 　　1.3 样品中黄酮化合物含量的测定 　　取1.2下所得黄酮化合物，置于25mL的量瓶中，加入50%乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，用移液管精确移取5mL于25mL容量瓶中，照1.3项下“加入5%亚硝酸钠…”操作起，测定其在508nm的吸光度，然后按照下述公式计算广枣中黄酮化合物的含量：黄酮含量=■（式中：A为508nm的吸光度；5为黄酮化合物稀释倍数。计算黄酮化合物的含量为11.723mg?g-1）。 　　1.4 动物试验 　　1.4.1 动物分组 　　将小鼠随机分为3组：运动对照组10只，广枣黄酮高、低剂量实验组各10只。各组小鼠均笼养，正常饮食。 　　1.4.2 剂量选择 　　以人体（以60kg计）推荐量每日6g的10、20倍，设两个剂量组：广枣黄酮低剂量组（1.0g?kg-1）、高剂量组（2.0g?kg-1）。运动对照组给予等量0.9%氯化钠注射液。动物每周称质量1次，并按相应剂量经口灌胃，连续30d。末次给药1h后将运动对照组、橙皮黄酮实验组小鼠尾根缚以自身体重5%的重物，让其在50cm×50cm×40cm、水深30±2cm水槽中游泳，观察并记录小鼠入水游泳至力竭时间（力竭标准是小鼠沉入水底10s不浮出水面，捞出后在平面不能进行翻正反射）。室温22-24 ℃，水温：30℃。运动后正常饮食，休息24h后用脱颈法处死。 　　1.4.3 指标测定 　　1）小鼠血清BUN含量的测定 　　将血浆静置于4℃冰箱2h，2500rpm离心15min，取血清，采用二乙酰-肟法测定血清BUN含量。 　　2）小鼠肝组织SOD及MDA含量的测定 　　小鼠在造模后处死，精确称取固定部位肝组织，制备肝组织匀浆，采用比色法分别测定相应指标。 　　1.5 统计学处理 　　所有数据以■±s表示，采用SPSS14.0统计软件包进行t检验，以P0.05为差异有显著性意义。 　　2 结果与分析 　　2.1 对小鼠力竭游泳时间的影响 　　本实验结果显示（表1），运动对照组小鼠力竭游泳时间显著低于广枣黄酮高剂量组、广枣黄酮低剂量组（P0.01，P0.05）。广枣黄酮高剂量组小鼠力竭游泳时间与低剂量组比较显著延长（P0.05）。 　　表1 各组小鼠体重及负重游泳力竭时间（■±s） 　　与对照组比较，?P0.05；与对照组比较，??P0.01 　　2.2 对小鼠血清BUN、肝组织SOD及MDA含量的影响 　　如表2所示，与对照组相比，广枣黄酮高、低的血清BUN含量均显著降低（P0.05），广枣黄酮高、低剂量组小鼠肝组织SOD活性显著增强（P0.05），MDA含量明显降低（P0.05）。 　　表2 各组小鼠血清BUN、肝组织SOD及MDA含量（■±s） 　　与对照组比较，?P0.05 　　3 小结与讨论 　　本次实验通过观察疲劳小鼠灌服广枣黄酮提取液后，力竭游泳时间显著延长，血清BUN含量较运动对照组明显降低，说明广枣黄酮能够对机体起到一定的保护作用，增强机体的抗疲劳能力。 　　研究发现，自由基与运动性疲劳有着密切的关系，是导致运动性疲劳的重要原因