生化分离整理思考题.docVIP

1、全球十大生物技术公司：全球生物技术公司的领头羊--安进公司 Amgen Biogen Idex 美国 ；吉利德迷信（美国）；健赞（美国）；Celgene 美国 ； Kyowa Hakko Kirin（日本）；Vertex 美 ；生命科技（美）；CSL 澳大利亚 ；Amylin 美 2、生物分离过程的一般流程？ 答：（1）若目标产物存在于细胞外，将细胞与培养液分离，对上清液粗分离、纯化、脱盐、浓缩、结晶干燥处理后得到成品。 （2）若目标产物存在于细胞内，将细胞与培养液分离开来，利用细胞破碎等方法将目标产物释放到液相中，除去细胞碎片后进行一系列粗分离和纯化操作，脱盐、浓缩、结晶干燥处理后得到成品。 （3）若胞内目标产物是以包含体形式存在的蛋白质，将细胞与培养液分离开来，利用细胞破碎等方法将目标产物释放到液相中，除去细胞碎片后，利用盐酸胍等变性剂溶解包含体，然后进行蛋白质的体外折叠复性，获得具有活性的目标蛋白质，再经过粗分离、纯化、脱盐、浓缩、结晶干燥处理后得到成品。 4、不同生物物质分离提取常用的单元操作？ 答：菌体：离心过滤、离心沉降、微滤；细胞碎片：离心过滤、离心沉降、泡沫分离 细胞：离心沉降、泡沫分离、微滤；血球：离心沉降 蛋白质：超离心、泡沫分离、超滤、透析、双水相萃取、反胶团萃取、反相色谱、 离子交换色谱、亲和色谱、疏水性色谱、色谱聚焦、凝胶电泳、等电点聚焦、 等速电泳、二维电泳、色谱电泳、溶液结晶、盐析沉淀、等电点沉淀、有机溶剂沉淀 核酸：超离心、双水相萃取、反胶团萃取、离子交换色谱、亲和色谱、疏水性色谱、凝胶电泳、色谱电泳、盐析沉淀、有机溶剂沉淀 糖类：超离心、反渗透、色谱电泳、超滤（用于多糖） 抗生素：超滤、有机溶剂萃取、双水相萃取、液膜萃取、离子交换色谱、溶液结晶 水：反渗透、电渗析 盐：反渗透、透析、电渗析 氨基酸：反渗透、电渗析、有机溶剂萃取、液膜萃取、反胶团萃取、离子交换色谱、 等电点聚焦、等速电泳、溶液结晶、等电点沉淀 有机酸：电渗析、有机溶剂萃取、液膜萃取、离子交换色谱、溶液结晶 香料：超临界流体萃取 脂质：超临界流体萃取、反相色谱 生物碱：超临界流体萃取 甾醇类：反相色谱 乙醇：渗透汽化 维生素：反相色谱 尿素：透析 工业常用吸附剂类型？可吸附的组分？ 活性炭：憎水性，脱色、脱臭、废气处理。多孔树脂：聚苯乙烯，聚丙烯酸树脂。硅胶、氧化铝等吸附剂：除水。分子筛：筛分作用，除水，混合物分离。 生物大分子层析专用：多孔性纤维素，琼脂糖凝 胶，葡聚糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶和羟基磷灰石。 2. 离子交换树脂的分类、命名和性能。 离子交换树脂以官能团的性质分类分为强酸、弱酸、强碱、弱碱、螯合、两性及氧化还原树脂（又称电子交换树脂） 性能评价：交换容量：单位质量的离子交换剂（mmol/g干树脂，或mmol/ml湿树脂）所吸附的一价离子的物质的量，是表征离子交换能力的主要参数3.6-4.5mmol/g干树脂。 交联度：与孔隙、机械强度有关。树脂基体聚合时所用二乙烯苯的百分数，对树脂的性质有很大影响。通常，交联度高的树脂聚合得比较紧密，坚牢而耐用，密度较高，内部空隙较少，对离子的选择性较强；而交联度低的树脂孔隙较大，脱色能力较强，反应速度较快，但在工作时的膨胀性较大，机械强度稍低，比较脆而易碎。 工业应用的离子树脂的交联度一般不低于4%；用于脱色的树脂的交联度一般不高于8% 溶胀度：转型时某些树脂体积变化大，10-20％（Na+→H+），近70％弱丙烯酸系。 密度：真密度：干真密度和湿真密度（阳1.2-1.3，阴1.0-1.1） 视密度（堆积密度）：干视密度和湿视密度（阳：0.75-0.9，阴0.6-0.75） pH范围：弱酸：5-14；弱碱：1-9。 3. 离子交换树脂的预处理方法。 1. 层析法分类 （1）凝胶过滤层析法（Gel filtration chromatography, GFC）凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等，是利用凝胶过滤介质为固定相，根据料液中溶质相对分子量的差别进行分离的液相层析法。不同的化合物由于其大小差异，在流经GPC柱时，不同分子量的化合物流经体积不同（大分子不能或难以进入凝胶网格结构的内部，直接从凝胶颗粒之间穿过，保留时间短；而小分子恰恰相反，保留时间较长）而得以分离。 GFC可分离洗脱体积介于V0和Vt之间的溶质，分离精度有限，料液的处理量也很小。 （2）离子交换层析ion exchange chromatography;IEC）固定相是离子交换剂的层析分离技术。样品中待分离的溶质离子，与固定相上所结合的离子交换，不同的溶质离子与离子交换剂上离子化的基团的亲和力和结合条件不同，洗脱液流过时，样品中的离子按结合力的弱强先后洗脱。 （3）疏水性作用层析（Hydrophobic