前列地尔脂微球体注射液防治急性心肌梗塞再灌注后无复流的.ppt

李 宪 伦 杨鹏 王勇 柯元南 卫生部中日友好医院心内科 2009年10月 内 容 研究背景 研究目的和意义 研究路线和方法 实验结果和分析 实验结论 研究展望 研 究 背 景 前列地尔的药理作用 前列地尔属于天然前列腺素 prostaglandin，PG 类物质，是一种高效生物活性物质， 主要成份是11α,15 S -双羟基-9-羰基-13-反前列烯酸； 前列地尔脂微球体注射液具有抑制血小板聚集、血栓素A2生成、动脉粥样脂质斑块形成及免疫复合物的作用，能扩张外周和冠脉血管； 能抑制血管平滑肌细胞的游离Ca2+，抑制交感神经末梢释放去甲肾上腺素, 使血管平滑肌舒张，血管扩张； 目前，临床上前列地尔主要用于血栓性脉管炎、闭塞性动脉硬化等症 。 研究路线和方法 实验流程 实 验 材 料 动物： 中华小型猪 体重22±3kg 购自中国农业大学 药品： 前列地尔微脂球体注射液 购自北京泰德制药有限公司 优维显370 注射液 声学造影剂Sonovue 购自意大利博克莱公司 Thioflavin-S和Evan’s 购自Sigma公司 仪器: Phlips V5000 血管造影机 Phlips iE33 心脏超声仪 实验结果和分析 实验二 前列地尔对猪急性心肌梗塞再灌注后微循环黏附分子的研究 动物及模型制作： 同实验一 药品： [125I] TNF-α放免分析试剂盒 解放军301医院东亚放免中心 [125I] IL-6放免分析试剂盒 解放军301医院东亚放免中心 SYBR-Green PCR试剂盒 TaKaRa公司 鼠抗猪整合素β-1 BD Bioscience公司 鼠抗猪PECAM-1抗体 abCom 公司 仪器: Rotor-gene 3000 PCR 仪 SH-682型放射免疫计数器 与模型组相比，前列地尔可以降低IL-6、TNF-α等炎症反应上游刺激因子的血清浓度。 前列地尔通过抑制粘附分子（整合素β-1、E-选择素、P-选择素、VCAM-1）的mRNA表达以及整合素β-1、PECAM-1的蛋白表达，阻碍了白细胞与内皮细胞之间的粘附、聚集，减轻了缺血再灌注对心肌微循环的损伤。 与模型组相比，在降低整合素β-1、E-选择素、P-选择素、VCAM-1 mRNA的浓度上，前列地尔具有统计学显著差异（P 0.01）。 实验三 前列地尔对猪急性心肌梗塞再灌注后微血管内皮细胞功能的研究 动物及模型制作： 同实验一 药品： SYBR-Green PCR试剂盒 TaKaRa公司 鼠抗猪PDGF-R抗体 Sigma 公司 鼠抗猪VEGF抗体 ABR公司 兔抗猪eNOS抗体 ABR公司 仪器: Rotor-gene 3000 PCR 仪 SH-682型放射免疫计数器 Mini-Cell 制胶系统 实验结论 前列地尔可以降低内皮素ET-1的血清浓度，提高内皮型一氧化氮合酶eNOS的mRNA和蛋白质表达，起到扩张血管的作用，改善心脏功能。 前列地尔可以抑制血小板衍化生长因子（PDGF）及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）的mRNA表达及PDGF受体蛋白表达，促进血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA和蛋白质表达，改善微循环灌注。 与模型组相比，前列地尔在促进血管内皮生长因子（VEGF）及一氧化氮合酶（eNOS）的mRNA和蛋白质表达上具有统计学差异（P 0.05）。 前列地尔组再灌区 前列地尔组无复流区 * * 按照顺时针方向选择6个400×视野，使用软件IPP6.0对血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1（CD31）在各组各区域阳性表达量进行定量测量和分析。各组各区域阳性表达产物的平均光密度（即积分光密度与所占面积的比值，IOD/Area）如图。与模型组相比，前列地尔能够明显抑制无复流区血小板内皮细胞粘附分子CD31的蛋白表达（*P 0.05, #P 0.05）。 # # 假手术组（400×） 病理切片HE染色 假手术组（200×） 模型组正常区（200×） 模型组正常区（400×） 模型组再灌区（200×） 模型组再灌区（400×） 模型组无复流区（400×） 模型组无复流区（200×） 前列地尔组正常区（200×） 前列地尔组再灌区（200×） 前列地尔组无复流区（200×） 前列地尔组正常区（400×） 前列地尔组再灌区（400×） 前列地尔组无复流区（400×） 各组HE染色切片按顺时针顺序随机选取6个400×视野进行拍照，利用Image-Pro Plus 6.0 图像分析软件计数HE染色切片血管周围浸润的炎性细胞，其中淋巴细胞形态为小而圆，中性粒细胞内可见多型分叶核。较模型组，前列地尔能够明显抑制白细胞的浸润（*P 0.05，#P 0.05）。 * * #