第七小组RNA干扰分解.pptVIP

RNA干扰 第七小组：宋凯琳，赵丽娜，李茹，慕亚芳，张乃舒，张俊平，郑杏枝 起始阶段外源导入、转基因或者病毒感染等方式进入细胞的dsRNA与RNaseⅢ家族Dice酶结合，被Dicer酶以一种ATP依赖的方式，逐步切割成长约21～23 nt的由正、反义链组成的siRNA，它的生成启动了RNAi反应。siRNA形成后与RNAi特异性酶结合形成RISC RNA-induced silencing complex-RISC 。RISC包括具有序列特异性核酸内、外切酶和解旋酶，能特异降解与siRNA同源的靶mRNA。 效应阶段在解旋酶的作用下，siRNA解链形成正义链和反义链， 反义单链作为引导序列引导RISC与同源性的mRNA结合，核酸酶在距离siRNA 3′端12个碱基的位置切割，最终使同源mRNA完全降解 放大阶段 SiRNA以mRNA为模板、siRNA为引物，在RNA依赖性RNA聚合酶 RNA-dependent RNA polymerase，RdRP 的作用合成新dsRNA。新合成的dsRNA继续被Dicer识别并切割生成更多的siRNA，siRNA再次作用于靶向mRNA，如此反复循环，最终使同源mRNA完全降解。 RNAi的特点: 1.高序列特异性 2.高效性 3.RNAi抑制作用迅速  4.RNAi作用的靶基因位点有选择性 5.dsRNA具有高稳定性 RNA介导的DNA甲基化RNA介导的异染色质形成RNA介导的DNA分子消融 RNAi的应用 1.高通量的基因功能研究 2.基因敲除 3.研究信号传导通路的新途径 4.基因治疗 5.基因表达调控 4.基因治疗 骨病治疗：医源性异位性骨化 神经系统：阿尔茨海默病 肿瘤方面：乳腺癌 结肠癌 胃癌等 病毒方面：抗HIV-1 病毒 抗丙型肝炎病毒 抗甲型流感病毒 抗脊髓灰质炎病毒 RNAi在抗HIV中的应用理论 抑制淋巴细胞表面的HIV受体CD4的表达 在病毒RNA基因被逆转录以前，作为RNAi的靶向基因 靶向作用新合成的mRNA和病毒基因组RNA 抑制参与病毒复制过程的宿主细胞某些基因的表达 RNAi 在 抗 HIV 中 的 应 用 RNA干扰技术遇到的难题 1.哺乳动物中dsRNA的导入诱导产生干扰素，引发非特异性的和全面的抑制基因表达 2.病毒的变异性较大，特异性设计的siRNA不起作用 3.脱靶现象的出现，会阻碍正常基因的表达 4.dsRNA具有浓度依赖性，而被导入细胞的 siRNA数天后就会消失 尽管RANi技术目前仍存在一些无法攻克的难题，但随着研究的不断深入，这些问题将逐步得到解决，我们相信，一个崭新的RNA时代即将来临! 谢谢大家！ * * RNA干扰现象最早是在1990年由Jorgensen研究组意外发现的。矮牵牛花花瓣的深紫色是由花青素决定的。Jorgensen和其研究组的成员在矮牵牛花中过量表达查尔酮合成酶,以期望得到颜色更深的矮牵牛花。但是,他们却意外地得到了具有白色和白紫杂色的矮牵牛花,原因是外源转入的编码查尔酮合成酶的基因同时也抑制了矮牵牛花中内源查尔酮合成酶基因的表达。人们把这种现象称为基因共抑制。 1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire和麻省理工大学医学院的Mello首次在秀丽新小杆线虫中证明双链RNA是引起基因沉默现象的根源。Fire和Mello的这一发现发表在1998年2月19日的Nature杂志上。在这篇文章中,Fire和Mello首次将这种双链RNA引起的基因沉默现象称为RNA干扰。RNA干扰技术的发现及其普遍应用引起了生命科学研究和基因治疗等领域的一系列变革, 因此获得了2006年诺贝尔生理学或医学奖。 1995年，Kemphues 的课题组在一次用反义RNA分子抑制线虫基因表达的实验中，发现正义RNA分子与反义RNA分子对目标基因的抑制作用一样强，这与他们预想的实验结果相差很大，他们预期反义RNA分子能通过与目标基因的信使RNA互补结合，从而抑制信使RNA翻译的启动。他们认为是实验的误差，没有继续深究。 RNA干扰（ RNA interference，RNAi ）是内源性或外源性双链RNA介导的细胞内mRNA发生特异性降解从而导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型缺失。 什么是RNA干扰？ 干扰的作用机制 R N A 转录后水平基因沉默（RNAi 转录水平基因沉默 siRNA介导的RNA干扰 miRNA介导的RNA干扰