浅谈毛状根及在药用植物中的应用讲义.ppt

毛状根技术VS愈伤组织和细胞悬浮培养 优点： 生长速度快 有许多分枝和根毛； 激素自养性 直接用于食品药品加工； 分化程度高 细胞分化而来，有遗传稳定； 有效成分多 借助基因工程，增加次生物含量； 大量培养易 向培养也释放代谢物。 对于不同的药用植物,影响其毛状根形成的因素不尽相同,可以通过试验来确定Ri质粒转化及毛状根诱导的最佳条件。 毛状根转化成功的植物以双子叶植物为多； 发根农杆菌侵染绝大多数的双子叶植物、少数单子叶植物及个别裸子植物； 已经成功诱导的个别单子叶植物如小麦、玉米、等。 外植体的类型 目前已从植物的叶片、茎、子叶、愈伤组织、下胚轴、根等多种类型的外植体上成功诱导出毛状根； 同一植物上不同类型的外植体诱发毛状根的频率不同； 不同植物上相同类型的外植体诱发毛状根的频率也不同； 诱导过程，一般采用的都是较幼嫩的组织，因这些细胞处于旺盛的分裂状态，容易接受外源DNA。 菌株类型 目前采用的发根农杆菌主要有天然农杆碱A4、ATCC15834、16834、LBA9402及1601、R1000、R1200等； 黄瓜碱型的2635、2657、2659等； 甘露碱型的 5196、TR101、TR7等； 每一种菌株对不同植物诱导毛状根的能力是不同的。 预培养时间 外植体经预培养后能够促进细胞分裂； 一般认为，分裂的细胞更容易整合外源DNA； 另外，预培养提高外源基因的瞬时表达和转化率 ，还能对外植体起到驯化的作用，使其适应于离体培养的条件。 遗传转化过程 遗传转化一般包括预培养、浸菌和共培养这三个过程，每个过程的处理都会对遗传转化率有影响。 预培养的时间过长，不利于农杆菌的侵入； 浸菌时间过长，对外植体造成较大的伤害不利于后期的分化。 共培养时间过长，农杆菌的生长就会过度，植物细胞会因受到毒害而死亡。 外源诱导物 农杆菌在侵染过程中，其基因受植物细胞释放的酚类物质的刺激而活化，从而提高对植物细胞的侵染力。 乙酰丁香酮(AS)等酚类物质在农杆菌介导的单子叶植物中已被广泛应用来提高转化率，在一些双子叶植物中也被证实可以提高转化率。 植物生长物质 在预培养和（或)共培养阶段添加一定量的植物生长物质，对毛状根的诱导也有一定影响 ； 李雅丽研究不同浓度IBA的共培养培养基对蒙古黄芪毛状根诱导率的影响,发现使用MS+IBA（0.3mg/L）毛状根诱导率最高。 王冲之等在共培养阶段考查了不同激素配比对西洋参毛状根诱导率的影响，惟有 MS+NAA(6mg/L)可产生毛状根。 3毛状根培养技术的应用 在生产次生代谢产物方面的应用 获得毛状根获转基因植物 利用毛状根再生植株，缩短良种繁育时间 毛状根为药用植物种质保存提供新途径 3.1在生产次生代谢产物方面的应用 次生代谢产物是指药用植物体内一大类化合物。 它们是细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需小分子化合物。 其产生和分布通常有种属、器官、组织以及生长发育时期的特异性。 药用植物器官培养生产次生代谢物的路线图 环境因子 环境因子主要包括： 激素、培养基、诱导子、光照 通过环境因子的调控可以显著提 高毛状根的生产能力 技术联合 ①用基因转化技术来调控次生代谢途径：用次生代谢关键酶基因来调控植物细胞的次生代谢是增加有效成分的有力措施。 ②用反义技术来调控代谢途径：利用反义技术将反义 DNA 或 RNA 片段导入植物细胞，使其某一代谢途径关键酶的活性得到控制，从而影响活性成分的含量。 3.2获得毛状根转基因植物 以Ri质粒为载体转入外源功能基因，获得药用植物的转基因植株。 通过转基因技术，一、可以对克隆出的目的基因进行功能验证；二、导入外源功能基因，可以改善药用植物的某些特性。 可以产生新的有效物质、提高栽培品种抗病虫害的能力等。 3.3毛状根再生植株，缩短良种繁育时间 毛状根再生植株与天然或栽培植株相比，一般具有叶片皱缩、节间缩短、植株矮化、须根发达等特点； 主要的药效成分含量高于天然的； 由于毛状根生长迅速，将其根尖切下，便可繁殖出大量的无性繁殖再生植株，大大缩短了药用植物的栽培周期。 3.4为药用植物种质保存提供新途径 毛状根具有高度的繁殖潜能，可以制成人工种子长期保存。 由于带有顶端分生组织或分枝的发根切段能够再生出整个植株，可以用海藻酸钠凝胶包裹发根切段制成了人工种子。 4存在的困难与解决方法 第一个困难是由于许多单子叶植物和部分裸子叶植物对发根农杆菌不敏感，还不能诱导出毛状根。 第二个困难是部分植物的毛状根有效成分含量较低或不含有效成分。 对于第一个困难