质粒提取常见问题解决办法.docVIP

质粒提取常见问题及解决办法 　　涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死? 　　参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 　　原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常? 　　参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办法： 　　1、降低培养温度，在20～25℃下培养，或室温培养可明显减少发生概率。 　　2、使用一些特殊菌株，如Sure菌株，它缺失了一些重组酶，如rec类等，使得质粒复制更加稳定。 　　3、质粒抽提有一个酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的NaOH浓度过高造成的，请大家注意一下! 　　【有两种方法可以在提质粒前判断菌生长是否正常： 　　1、利用你的嗅觉。只要平时做实验仔细点就能闻出大肠杆菌的气味，新鲜的大肠杆菌是略带一点刺鼻的气味，但不至于反感。而在泥水状的菌液中你只要一凑过去就感觉到其臭无比或者没有气味，可以和正常菌液对照。 　　2、肉眼观察活化菌株。 对于生长不正常的菌液进行划板验证或者稀释到浓度足够低涂板，第二天观察单克隆生长情况，LB平板生长的DH5A正常形态在37℃16h后直径在1mm左