1.1基因工程(工具)上课教案.pptVIP

3.下列四条DNA分子，彼此间具有粘性末端的一组是 A．①② B．②③ C．③④ D．②④ 答案：D 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 粘性末端相连接时： １、看游离碱基是否配对。 ２、看两条链上的切点是否相同。 （碱基组成相同但次序相反） 平末端项链时：看两条链上的切点是否相同。 （碱基组成相同但次序相反） CGTCA … … G (1) …GC ?? …CG (3) …G …CTTAA (4) G… ???????????? ACGTC… (5) …GC …CG (6) GT… ??????CA… (7) AATTC… ???????????? G… (8) …AC ???????? …TG (2) * * 一、基因工程的概念： 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物的遗传性状。 原理 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因重组 生物体外 基因/DNA 分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 基因 定向 基因工程的操作步骤 提取目的基因 目的基因与运载体结合 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 苏云金杆菌 毒蛋白基因 毒蛋白 杀死害虫 棉花细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤一的工具： 关键步骤二的工具： 关键步骤三的工具： 基因的剪刀——限制性核酸内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运输工具——运载体 （限制酶） 第一节 DNA重组技术的基本工具 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 粘性末端 平末端 酶的特异性 粘性末端： 当限制酶在识别序列的中性轴线两侧将ＤＮＡ的两条链分别切开时，产生的末端。 EcoRΙ 中轴线 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 什么叫黏性末端？ 限制酶 什么叫黏性末端？ EcoRΙ 黏性末端特点： 被限制酶切开的DNA两条单链的切口（碱基相同，次序相反），带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口（碱基相同，次序相反），是平整的，这样的切口叫平末端。 问题：限制酶与ＤＮＡ水解酶是一样的吗？ 为什么？ ２、来源 １、作用： 二、 “分子缝合针” ——DNA连接酶 从Ｔ４噬菌体中分离的：Ｔ４噬菌体链接酶 大肠杆菌中分离到的Ｅ．ＣｏｌｉＤＮＡ连接酶。 把2个DNA片段末端之间的缝隙“缝合”起来。 G A A T T C C T T A A G G P A P 限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否一样呢？ ３、DNA连接酶链接末端的种类： E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 ＤＮＡ连接酶与ＤＮＡ聚合酶是一回事吗？ 三、基因进入受体细胞的工具 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒、噬菌体 运载体：要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，还得将这个基因送到乙生物的细胞里去！能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。 作用：将重组基因导入受体