2.2.1动物细胞培养和核移植技术教案.ppt

生产蛋白质生物制品（病毒疫苗） 检测有毒物质 （许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。） 为烧伤病人植皮 利用动物细胞培养技术中细胞的贴壁生长和接触抑制特点，可以用烧伤病人自己的健康皮肤细胞培养出大量的自身薄层皮肤细胞供植皮所需。 用于科学研究（生理、病理、药理） 植物组织培养和动物细胞培养的比较 有关概念区分 有关概念区分 * * 专题二 细胞工程 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养技术 动物细胞融合技术 单克隆抗体技术 核移植技术 动物细胞工程常用技术 是其他动物细胞工程技术的基础 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 1、概念 2、原理 细胞增殖（有丝分裂） 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖 3、动物细胞培养的过程 制成细胞悬浮液 胰蛋白酶处理分散成单个细胞 原代培养 传代培养 剪碎组织 取动物组织块 胰蛋白酶处理、分装 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 10代 细胞 部分细胞“癌变”，无限传代 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞贴壁 剥离、分瓶 细胞株 细胞 细胞系 培养过程： 增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养 去掉组织间 蛋白 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 讨论： 4、动物细胞培养的条件 1.无菌、无毒环境 2.全面的营养物质 3.适宜的温度和pH 4.气体环境 (无菌处理，加抗生素，定期更换培养液) 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等严格配置成的合成培养基，再加上血清、血浆等 36.5±0.5℃ O2和CO2（95%空气和5%CO2） CO2的作用主要是维持培养液的pH 7.2—7.4 保证细胞顺利的生长增殖 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 5、动物细胞培养的应用 动物细胞培养技术应用 这只老鼠身上的“人耳”是由我国科学家曹谊林教授利用细胞工程技术复制出来的。 器官克隆一例 　“人耳老鼠”是一只裸鼠。 “人耳”形成的过程是：先用一种高分子材料——聚羟基乙酸做成“人耳”的模型支架，然后让人体的软骨组织细胞在这个支架上繁殖生长。一周以后，在裸鼠的背上割开一个口子，将培育过的这个“人耳”模子植入缝合，软骨组织的细胞不断增殖，聚羟基乙酸做成的支架慢慢地被机体降解吸收，使“人耳”和裸鼠融为一体。 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基性质 原理 动物细胞培养 植物组织培养 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清等 植物体 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞产物 细胞株、细胞系 二、动物体细胞核移植技术 1、概念 2、原理 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 动物细胞核的全能性 克隆就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。 电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎 卵母细胞采集、培养 MⅡ期卵母细胞 供体牛 供体细胞注入去核卵母细胞 代孕母牛 克隆牛 体细胞培养 去核卵母细胞 去核 胚胎 移植 3、体细胞核移植的过程 思考题： 1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ 卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。 2、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？ 为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。 3、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？ 10代以内的细胞一般能保持正常二倍体的核型，未突变。 思考题： 二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。 思考题： 4、细胞核移植生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。 改良动物品种，促进优良畜群繁育 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 治疗人类疾病，如用于组织器官的移植 保护濒危动物 深入了解胚胎发育及衰老过程 存在的问题？ 成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆