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新型卟啉化合物测定不孕不育症精浆锌介绍 精浆锌通过干扰垂体分泌促性腺激素，降低性腺功能而影响精液质量和精子代谢[1]，因此是诊断男性不孕症的重要微量元素指标。目前，临床上测定锌的方法主要有原子吸收光谱法、电化学法等[2]，但这些方法均需要特殊的仪器和特定的工作环境，设备昂贵，试剂成本高。本课题依据张志华等[3]的报道卟啉吡啶季铵盐分光光度法测定水中痕量铜原理用于测定精浆锌离子，经过多例临床实验表明，该方法灵敏度高，准确性好，简便、价廉、快速，克服了现有临床测锌方法的缺点。 关键词：卟啉；精浆锌 ；分光光度法 中图分类号：R271.14 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）5-139-01 1 原理 溴化5-[4-N-（对硝基）苄铵基吡啶基]-10，15，20-三（4-N-吡啶基）卟啉在酸性介质中与锌反应，产生可溶于有机溶剂的有色复合物，与同样处理的锌标准液比色，求得其含量。 2. 材料与方法 2.1 主要仪器： 2.1.1 UV-900分光光度计； 2.1.2普析通用MB5血液元素分析仪； 2.2 试剂 2.2.1：锌标准液（0.15mmol/L） 2.2.2： 卟啉显色剂溶液：称取一定量溴化5-[4-N-（对硝基）苄铵基吡啶基]-10，15，20-三（4-N-吡啶基）卟啉溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，配成浓度为1.998mmol/L溶液； 2.2.3邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲溶液：pH 1.2； 2.2.4镁遮蔽液： 称取10g 十二烷基硫酸钠溶于约500 ml 蒸馏水中， 再加入氟化铵10g， 待溶解用蒸馏水稀释至900ml。 2.3病例 正常生育男性精液200例，选自至少已生育过一个小孩的男子，年龄在28～38岁间；男性不育症患者210例，年龄24～40岁，平均28岁（不育组），身体健康，性生活正常，均为婚后2年以上未育，均进行详细的体格检查，排除生殖器官先天性异常、遗传、内分泌障碍，以及损伤、感染等引起的器质性的病变；两组病例均禁欲5天以上采用手淫法收集精液，于2小时内送检，离心分离精浆，-20℃保存。 2.4 操作[3] 2.4.1 吸光光度法 （1）取三支5ml试管，分别标明空白管、测定管、标准管。 （2）在测定管中，加入精浆20?l，空白管加重蒸馏水20?l，标准管中加锌标准液20?l。 （3）各管加pH 1.2的邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲溶液0.5ml，卟啉溶液0.5ml，镁遮蔽液1ml，摇匀，37℃水浴15min，加重蒸馏水2ml，用UV-900分光光度计，0.5cm比色杯，438.0nm波长，空白管调零，测定标准管、测定管吸光度。 （4）计算 2.4.2 原子吸收法 按普析通用MB5血液元素分析仪标准操作文件操作。 2.4.3 两组标本均用上述两种方法测定。 2.5 统计学方法 实验数据用X士SD表示，采用t检验，以P 0.05为具有统计学意义。 3 结果 3.1与原子吸收法比较 200例正常生育男性精浆用分光光度法检测结果均值为（2.14±87.10）mmol/L，用原子吸光谱法测得均值为（2.16±69.23 mmol/L）， 二者关系数r 0.9986。 3.2正常生育男性组与不孕症组比较 不孕症组精浆锌均值为（1.65±5.71） mmol /L。与正常生育男性组（2.14±87.10mmol/L）相比差异有统计学意义（P 0.05）。 3.3 重复性： 取n 30，每份测定4次，变异系为为2.6 %。 4.讨论 人类精液锌包括精浆锌及精子锌两部分，精液锌能与琉基结合可逆性地抑制精子核染色质解聚，延长精子寿命[4]。其对精子获能也有影响，高浓度的锌对精子顶体酶活性有抑制作用，从而抑制顶体反应发生。因此，精液锌减少可影响精子功能。 据报道，锌元素对维持性器官的发育和正常功能具有非常重要的作用，缺锌影响垂体分泌促性腺激素，可导致性功能减退，睾丸缩小、重量减轻、精子数量减少，重者可使精子生成陷于停止[5]。 目前测微量元素锌有原子吸收法和分光光度法，但前者需大型仪器和特殊的设施，基层医疗机构受经济条件所限无法购买大型设备，该方法很难推广。本法采用分光光度法，操作简便，试剂价格低廉， 又能避免镁离子的干扰，与公认的原子吸收法比较，方法误差在允许范围，结果准确等优点，易被基层医疗卫生机构接受。我室采用该方法已对210例男性不育症患者进行精浆锌的测定，为患者诊治提供了准确的依据。 参考文献： [1]王雪楠 牛焕付 刘晓钟. 少精患者精浆锌酸性磷酸酶的检测及意义[J].济宁医学院学报.2007，2（30）：133. [2]高榜华 叶英，精浆锌的简易测定方法[J]. 四川医学，1998，9 （3）：165-166 [3]张志华，韩士田，卟啉吡啶季铵盐分光光度法测定水中痕量铜 [J].理