链球菌和葡萄球分离鉴定.docVIP

青岛农业大学 兽医微生物学课程论文 题 目： 链球菌和葡萄球菌分离鉴定 姓 名： 学 院： 动物科技学院 班 级： 马业科学1201 学 号： 2012 任课教师： 温建新 二0一四 年 四 月 十二 日 链球菌和葡萄球菌分离鉴定 班 2012 指导教师 温建新 摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。 关键词：葡萄球菌；链球菌 引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌，因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘醇链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌”球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产气需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1待鉴定菌A.B各一，健康兔。 1.1.2 试剂及其配制1:5兔血浆，革兰氏染色液，百分之三的过氧化氢溶液 1.1.3 器材：普通营养琼脂平板，血琼脂平板，甘露醇微量发酵管。无菌注射器，碘酒棉，酒精棉，无菌离心管，无菌平皿，离心机，接种环，小试管，载玻片。 1.2方法 1.2.1 划线分离，由接以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用 兔心脏取血法和大、小鼠心脏取血法类似，且比较容易掌握。将兔固定在手术台上，用碘酒酒精消毒皮肤，选择心搏最明显处穿刺，针头刺入心脏后即有血液涌入注射器。取得所需血量后，迅速将针头拔出，这样心肌上的穿孔易于闭合。经6～7天后，可以重复进行心脏采血 1.2.5形态鉴定：进行革兰氏染色。 1.2.6凝固酶试验：挑取细菌菌苔，混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆，同时用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小时，观察结果，凝固者B为阳性。 1.2.7甘露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中，置37摄氏度培养24小时，观察情况。 2 结果与分析 2.1普通琼脂是直径1到2毫米的白色或米色略微凸起的光滑球面 2.3凝固酶试验：挑取细菌菌苔，混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆，同时用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小时，观察结果，凝固者为阳性。 2.4甘露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中，置37摄氏度培养24小时，观察情况。 3.1 结果讨论 经试验结果鉴定A为链球菌，B为金黄色葡萄球菌。 3.2操作的过程中可能出现的问题：触媒实验 ①3％H2O2溶液要新鲜配制。 　　不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。 取对数生长期的细菌。 【1】李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。 【2】陆承平，兽医微生物学第四版。 【3】兽医微生物学 原书第2 of support and hanger. Cable hole plugging gaps should use qualified fireproof materials, block surface should hav