第三章酶化学终结版重点.ppt

* 3．制备战略(总) （1）选材 （2）破碎细胞 （3）抽提 （4）浓缩 （5）纯化 3．制备战略1 （1）选材：含量高，易于分离。 （2）破碎细胞：研磨，匀浆器，捣碎机。 （3）抽提：抽提时注意的因素：pH、温度、盐及蛋白酶等。一般在低温下，调节pH至等电点，用盐析（硫酸铵或氯化钠）或有机溶剂（乙醇、丙酮、异丙醇等）使酶沉淀。 酶是生物活性物质，一般在0—50C进行提纯。乙醇、丙酮等有机溶剂分级分离时必须在－150C—－200C进行，酶制品一般都应在－200C以下低温保存。 3．制备战略2 ： （4）浓缩：抽提液和发酵液中酶浓度一般都很低，所以，在纯化前要进行浓缩，常用的方法有： ①蒸发：高真空的条件下，大面积热空气接触，使水分在瞬时蒸发，而达到目的。由于水分蒸发时能带走热量，所以，只要真空条件好，受热并不强。 ②超过滤。 ③凝胶过滤。 ④冰冻浓缩。 ⑤其他：如聚乙二醇浓缩等。 3．制备战略3 ： （5）纯化：首先了解所需纯化酶的理化性质（溶解度、分子大小和解离特性），以及酶的稳定性等。判断所选方法与条件的适当性，控制操作条件。具体纯化方法有： ①根据分子大小：凝胶过滤、超滤、超离心等。 ②根据解离性质：离子交换、电泳、等电聚焦等。 ③根据溶解度：盐析、有机溶剂沉淀等。 ④酶与底物、辅助因子及抑制剂的专一性亲和作用，可采