6tgselectionprotocol.docVIP

The gpt Assay of gpt delta Transgenic Mouse (Ver. 4.02ja / 2008.01.22) 大腸菌gpt遺伝子はguanine phosphoribosyltransferaseをコードしている。　この酵素は、プリンのサルベージ経路においてグアニンのフォスフォリボシル化を触媒している。　しかし6-thioguanine (6TG)もまたこの酵素の基質となり、こちらはDNA中に取り込まれて細胞に毒性を示すことが知られている。　従って野生型のgpt遺伝子を持った大腸菌は6TGを含む寒天培地上で生育することができない。　一方gpt遺伝子に変異を持つ大腸菌は6-thioguanineを含む培地上でコロニーを作ることができる。　すなわちgpt遺伝子に変異を持つ大腸菌のみをポジティブに選択することが可能である。　gpt遺伝子のコード領域は456塩基対であり、DNAシークエンスによる迅速な変異部位の同定に適している。 トランスジェニックマウスgpt deltaには、λEG10シャトルベクター DNAが組み込まれている。　このベクター中には直鎖状にしたプラスミドDNAが挿入されている。　直鎖状プラスミドDNA上には大腸菌gpt遺伝子、クロラムフェニコール耐性遺伝子 (CAT)、pBR322の複製開始部位が存在し、両端には一対のlox P