蛋白质的纯化课件分析.pptVIP

蛋白质的分离纯化与鉴定Isolation, Purification and Identification of Protein 杨学习 世界生命科学的圣地与分子生物学的摇篮 --冷泉港实验室（The Cold Spring Harbor Laboratory） 分子生物学圣经—分子克隆实验指南 蛋白质工程中进行蛋白质分离纯化的必要性 化学修饰法对蛋白质进行修饰改造时需要单一的蛋白质作为原材料 为了研究蛋白质工程的效果，需要单一的蛋白质作为实验材料研究其结构与功能 为了生产性能更优良的蛋白质，需要对设计改造过的蛋白质进行大量纯化，从而开发出相关产品 目录 前言 蛋白质纯化方法 蛋白质纯化总原则及步骤 总原则 蛋白质纯化的步骤 材料的选择与预处理 蛋白质的提取 蛋白质的粗分级 蛋白质的细分级 蛋白质的鉴定 蛋白质纯化的原则 蛋白质的鉴定 一、蛋白纯化方法 能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因是不同蛋白质在许多理化性质上有着极大的不同。 这些理化性质的不同是由于氨基酸的数目和序列不同造成的。 1.与蛋白质分离纯化相关的理化特性 分子大小 分子形状 带电特性 溶解特性 与配体特异性结合不同 吸附性质 变性和复性 1.1分子大小 大小 蛋白质的分子大小主要取决于蛋白质肽链的数目及每条肽链的氨基酸残基数目。 几百—百万 Da 常用方法 透析 超滤 凝胶过滤 离心 凝胶